[发明专利]一种新型检测个体化胰岛素的免疫质谱试剂盒及制备方法

摘要

本发明涉及一种检测、评估个体化胰岛素水平的免疫质谱试剂盒及制备方法，为一种非侵入性的体外检测方法。本方法用抗体吸附表面基质及质谱法进行鉴别检测发现一种新型变异的胰岛素。变异的胰岛素或5835.65Da峰值可用于个体化胰岛素水平的检测及评估。通过5835.65Da峰值或被抗体吸附表面基质上捕获的变异的胰岛素，用标准化质控血清控制下的定量性质谱分析来检测，可以应用到已经脱离人体体液的生物标志组合的检测试剂盒的开发。本方法精确、方便且快捷。

主权项

一种来自胰腺癌伴有重型糖尿病病人的生物样品中的生物标志，该生物标志为变异的胰岛素；其分子量特征为5835.65Da；该生物标志的鉴定是通过以下步骤实现：(1)样品处理及质谱标准化质控血清制备；(2)样品上样至基质上；(3)洗涤；(4)质谱的定量控制及质谱测试；其中所述步骤(1)将生物样品稀释在结合缓冲液中；用O型血，男女相等，混合制备质谱的标准化质控血清；所述步骤(2)将质谱的标准化质控血清及样品点样在已标记上抗胰岛素抗体的基质上，基质的支持物用陶瓷珠、磁性珠、多聚体或Sepharose beads；所述步骤(3)用洗涤液洗涤；在样品完全干燥前将第一份洗涤液加到该位点；洗涤液在位点上至少停留10秒；彻底清除第一份洗涤液，用第二份洗涤液重复以上步骤；用1～2％三氟乙酸洗脱液彻底洗涤磁珠，将生物标志洗脱至质谱专用的金属片上，自然干燥金属片，加0.5μL以50％乙腈、0.5％三氟乙酸制备的吸能分子标准溶液；吸能分子用sinapinic acid或alpha‑cyano‑4‑hydroxycinnamic acid；所述步骤(4)用激光解吸/离子化飞行时间质谱仪，用波长337nm的氮激光仪和80cm或120cm飞行管分析阵列去分析变异的胰岛素；用仪器的软件进行定量性质谱自动调控：每次测试前，用质谱的标准化质控血清，将标准化质控血清中用于定量的标准峰4091.1Da或6634.0Da强度调至质谱仪信号强度最大值的50％。