[发明专利]一种红豆杉叶片愈伤组织的诱导和继代培养的方法及其所用的培养基

摘要

本发明公开了一种红豆杉叶片愈伤组织的诱导和继代培养的方法。即以当年生南方红豆杉的幼嫩叶片为外植体，消毒后接种于特定的诱导培养基中，在20-22℃条件下暗培养20天后，选取疏松、淡黄色的愈伤组织，转入特定的继代培养基中，在20-22℃条件下进行继代培养20天后即得到红豆杉叶片的愈伤组织。本发明的一种红豆杉叶片愈伤组织的诱导和继代培养的方法，具有诱导率高、出愈时间短、生长速度快、污染率低等特点，并解决运用植物细胞培养技术对红豆杉愈伤组织进行大规模培养的问题。

主权项

一种红豆杉叶片愈伤组织的诱导方法，其特征在于具体包括如下步骤：（1）、外植体的消毒取当年生南方红豆杉的幼嫩叶片，经流水冲洗，然后依次用酒精、氯化汞消毒, 蒸馏水洗净后获得消毒的红豆杉外植体；（2）、愈伤组织诱导培养将步骤（1）所得的消毒的红豆杉外植体接种于诱导培养基上，控制温度为20‑22℃条件下暗培养，20天后得到诱导培养后的愈伤组织；所述的诱导培养基，按每升计算，由400mg NH4N03、556mg Ca(NO3)2.4H2O、990 mg K2SO4、96 mg CaCl2.2H2O、170 mg KH2PO4、0.25 mg Na2MoO4.2H2O、370 mg MgSO4.7H2O、22.4mg MnSO4.H2O、8.6mg ZnSO4.7H2O、0.25mg CuSO4.5H2O、27.8 mg FeSO4.7H2O、37.3 mg Na2‑EDTA、100 mg肌醇、1.0mg维生素B1、0.5 mg烟酸、0.5 mg维生素B6、2.0 mg甘氨酸、1mg IBA、0.25mg 6‑BA、0.5mg CH 、20 g蔗糖、 8g琼脂、2g活性炭和余量的水组成；或由400mg NH4N03、556mg Ca(NO3)2.4H2O、990 mg K2SO4、96 mg CaCl2.2H2O、170 mg KH2PO4、0.25 mg Na2MoO4.2H2O、370 mg MgSO4.7H2O、22.4mg MnSO4.H2O、8.6mg ZnSO4.7H2O、0.25mg CuSO4.5H2O、27.8 mg FeSO4.7H2O、37.3 mg Na2‑EDTA、100 mg肌醇、1.0mg维生素B1、0.5 mg烟酸、0.5 mg维生素B6、2.0 mg甘氨酸、2mg  IBA、0.5mg CH 、20 g蔗糖、8g琼脂、2g活性炭和余量的水组成；或由1650mg NH4NO3、1900mg KNO3、440mg CaCl2·2H2O、370mg MgSO4·7H2O、170mg KH2PO4、0.83mg KI、6.2 mgH3BO3、22.3mg、MnSO4·4H2O、8.6mg ZnSO4·7H2O、0.25mg Na2MnO4·2H2O、0.025mg CuSO4·5H2O、0.025mg CoCl2·6H2O、27.8mg FeSO4·7H2O、 37.3mg Na2‑EDTA·2H2O、100 mg肌醇、1.0mg维生素B1、0.5 mg烟酸、0.5 mg维生素B6、2.0 mg甘氨酸、2mg IBA 、0.5mg CH 、20 g蔗糖、 8g琼脂、2g活性炭和余量的水组成； （3）、愈伤组织继代培养将步骤（2）所得的初代愈伤组织接种于继代培养基上，在20‑22℃条件下暗培养，20天后得到继代培养后的愈伤组织；所述的继代培养基，按每升计算，由400mg NH4N03、556mg Ca(NO3)2.4H2O、990 mg K2SO4、96 mg CaCl2.2H2O、170 mg KH2PO4、0.25 mg Na2MoO4.2H2O、370 mg MgSO4.7H2O、22.4mg MnSO4.H2O、8.6mg ZnSO4.7H2O、0.25mg CuSO4.5H2O、27.8 mg FeSO4.7H2O、37.3 mg Na2‑EDTA、100 mg肌醇、1.0mg维生素B1、0.5 mg烟酸、0.5 mg维生素B6、2.0 mg甘氨酸、2 mg 2,4‑D 、1 mg 6‑BA 、20 g蔗糖、8g琼脂、2g活性炭和余量的水组成；或由400mg NH4N03、556mg Ca(NO3)2.4H2O、990 mg K2SO4、96 mg CaCl2.2H2O、170 mg KH2PO4、0.25 mg Na2MoO4.2H2O、370 mg MgSO4.7H2O、22.4mg MnSO4.H2O、8.6mg ZnSO4.7H2O、0.25mg CuSO4.5H2O、27.8 mg FeSO4.7H2O、37.3 mg Na2‑EDTA、100 mg肌醇、1.0mg维生素B1、0.5 mg烟酸、0.5 mg维生素B6、2.0 mg甘氨酸、2mg 2,4‑D 、0.5mg CH 、20 g蔗糖、8g琼脂、2g活性炭和余量的水组成；或由1650mg NH4NO3、1900mg KNO3、440mg CaCl2·2H2O、370mg MgSO4·7H2O、170mg KH2PO4、0.83mg KI、6.2 mgH3BO3、22.3mg、MnSO4·4H2O、8.6mg ZnSO4·7H2O、0.25mg Na2MnO4·2H2O、0.025mg CuSO4·5H2O、0.025mg CoCl2·6H2O、27.8mg FeSO4·7H2O、 37.3mg Na2‑EDTA·2H2O、100 mg肌醇、1.0mg维生素B1、0.5 mg烟酸、0.5 mg维生素B6、2.0 mg甘氨酸、2 mg 2,4‑D 、1 mg 6‑BA 、20 g蔗糖、8g琼脂、2g活性炭和余量的水组成。