[发明专利]一种小秦艽组织培养离体快速繁殖方法

摘要

本发明涉及一种小秦艽组织培养离体快速繁殖方法，该方法包括以下步骤：⑴外植体的选择和消毒处理：取温室两年生小秦艽幼苗的茎尖为外植体，经浸泡灭菌、冲洗，即得消毒后的外植体茎尖；⑵外植体接种：将消毒后的外植体茎尖接种在愈伤组织诱导培养基上，形成愈伤组织；⑶愈伤组织增殖及分化培养：将愈伤组织接种到愈伤组织增殖及分化培养基上，形成小秦艽单芽；⑷生根诱导：将小秦艽单芽进行分株后转入生根培养基中培养，形成完整再生小苗；⑸育苗基质消毒；⑹植株移栽：将完整再生小苗直接移栽到消毒后的育苗基质中，炼苗后即长成正常小秦艽植株。本发明克服了小秦艽育苗周期过长、繁殖系数低的问题，易于操作、可进行工厂化快速育苗。

主权项

种小秦艽组织培养离体快速繁殖方法，包括以下步骤：⑴外植体的选择和消毒处理：取温室两年生小秦艽幼苗的茎尖为外植体，用质量浓度为0.1%~0.2%的升汞浸泡灭菌5~8分钟，并用无菌去离子水冲洗4~6次后，即得消毒后的外植体茎尖；⑵外植体接种：将所述消毒后的外植体茎尖接种在愈伤组织诱导培养基上，其中每25ml所述愈伤组织诱导培养基中接种1棵所述消毒后的外植体茎尖；在温度为25℃±1℃、光照强度为30~60 umol . m‑2. s‑1、光照时间为12~14 h .d‑1的条件下培养20~25天，在茎尖基部形成浅黄色致密愈伤组织；⑶愈伤组织增殖及分化培养：将所述愈伤组织接种到愈伤组织增殖及分化培养基上，其中每25ml所述愈伤组织增殖及分化培养基中接种2块所述愈伤组织；在温度为25℃±1℃、光照强度为30~60 umol . m‑2. s‑1、光照时间为12~14 h .d‑1的条件下增殖45~60天，愈伤组织表面分化出幼小的单个芽，形成小秦艽单芽；⑷生根诱导：将所述小秦艽单芽进行分株后转入生根培养基中，其中每25ml所述生根培养基中接种1棵所述小秦艽单芽；在25℃±1℃、光照强度为30~60 umol . m‑2. s‑1、光照时间为12~14 h .d‑1的条件下培养15~20天后，小苗基部出现白色、粗壮短根，并长出完整根系，即得完整再生小苗；⑸育苗基质消毒：将育苗基质在115~121℃温度下进行高温消毒，15~20min后即得消毒后的育苗基质；所述育苗基质是指腐殖质与珍珠岩按2：1重量比混合而成的混合基质；⑹植株移栽：将所述完整再生小苗直接移栽到所述消毒后的育苗基质中，炼苗后即长成正常小秦艽植株；所述一棵完整再生小苗种植在所述消毒后的育苗基质10cm2的范围内。