[发明专利]一种试管内沙基质培养油茶无菌芽的方法

摘要

本发明公开了一种试管内沙基质培养油茶无菌芽的方法，其特征在于采用80～100目新鲜干净的河沙按1/4装入量装入试管，加入含0.01～0.02g/L抗坏血酸的MS液体培养基至湿润混匀作为培养基质，将1～5年生油茶龄植株树冠外围中上部带有腋芽的半木质化或刚木质化的嫩枝剪切成带腋芽1～2个、长3.0～4.0cm的小段，经消毒扦插至培养基质中培养，剪取新萌发的嫩芽转接至MS培养基中继续培养得到油茶无菌芽。采用河沙和培养液作为培养基质，与油茶的生长习性相适应，更适宜油茶新芽的生长和萌发，在简单接种后，减轻褐化程度，降低污染率，不需频繁转接，培养12～18天可见腋芽开始萌发，萌发时间缩短，且萌发率达85～93%，培养油茶无菌芽成功率高，经济效益好。

主权项

一种试管内沙基质培养油茶无菌芽的方法，包括外植体采集、培养基质准备、培养和转接工序，其特征在：以河沙和培养液作为培养基质，将经消毒油茶茎段扦插至培养基质中培养，剪取新萌发的嫩芽转接至MS培养基中继续培养得到油茶无菌芽，其操作步骤如下：（1）外植体采集：选择１～５年生油茶植株树冠外围中上部的半木质化或刚木质化并带有腋芽的嫩枝;（2）外植体消毒：将采集的嫩枝去除叶片、老茎段部分，用清水洗净，再用沾有肥皂粉或洗洁精的软毛刷进行刷洗，再用去离子水清洗1～3次，将嫩枝剪切成带腋芽1～2个、长2.5～4.0cm的小段，用去离子水洗2～3次后置于超净台上进行外植体消毒;（3）培养基质准备：将河沙装入试管长度1/4～1/5，再加入少量培养液至湿润，用玻棒混匀，在121℃灭菌30～40分钟得到河沙培养液混合的培养基质;（4）接种：在超净台中将消毒处理后的茎段两端伤口剪去处2～3mm,以扦插的方式接种于试管内的培养基质中;（5）培养：接种后的试管置于培养室中培养，室温控制在25±2℃，光照采用自然散射光，光照强度控制为1000～25OOLX,每天光照10～14h。（6）转接：外植体在基质中培养至腋芽萌发，剪取新萌发出的嫩芽转接至MS培养基中继续培养，7天后观察检测污染情况，无污染的新芽再用于进行后续组培操作。