[发明专利]一种牡丹胚珠的离体培养方法

摘要

一种牡丹胚珠的离体培养方法，取受精后15—90天的牡丹子房，用氯化汞消毒后取出胚珠，将胚珠分为15—48天胚珠组和49—90天胚珠组；将15—48天胚珠组接种到MS培养基避光培养3—15d后接种到MS培养基Ⅱ，避光培养10天，后见光培养7—27天；之后将其再次接种到MS培养基Ⅱ中见光培养8—28天，得到成熟的牡丹种子Ⅰ；对49—90天胚珠组先进行10天的避光培养，后转为见光培养7—27天，然后再次接种到MS培养基Ⅱ中进行8—28天的见光培养，得到成熟的牡丹种子Ⅱ。可用于牡丹胚胎发育的离体研究，解决观赏性好而胚发生早期败育及牡丹远缘体细胞杂交败育的问题，通过胚珠培养，还可进行牡丹品种的改良研究。

主权项

一种牡丹胚珠的离体培养方法，其特征在于，其具体步骤为：步骤一、取受精后15—90天的牡丹子房，利用氯化汞对牡丹子房进行消毒，后取出胚珠，将胚珠分为两组，即15—48天胚珠组和49—90天胚珠组，备用；步骤二、取步骤一中的15—48天胚珠组，将其接种到pH为5.4—6.0的MS培养基Ⅰ中，培养温度为15—25℃，避光培养3—15d，备用；步骤三、取步骤二中避光培养后的15—48天胚珠组，将其接种到pH为5.4—6.0的MS培养基Ⅱ中，培养温度为15—25℃，避光培养10天，后将含有15—48天胚珠组的MS培养基Ⅱ放在光线强度为1600—1800勒克斯，每天光照16小时，培养7—27天，备用；步骤四、取步骤三中经过见光培养7—27天后的15—48天胚珠组，将其再次接种到pH为5.4—6.0的MS培养基Ⅱ中，在光线强度为1600—1800勒克斯，每天光照16小时，培养8—28天，得到成熟的牡丹种子Ⅰ；步骤五、依据步骤三的方法，对步骤一中的49—90天胚珠组先进行10天的避光培养，后转为见光培养7—27天，然后依据步骤四的方法，对经过见光培养7—27天后的49—90天胚珠组再次接种到MS培养基Ⅱ中进行8—28天的见光培养，得到成熟的牡丹种子Ⅱ；所述的MS培养基Ⅰ的组成成分：每升MS培养基Ⅰ中含有1—10mg的2,4‑二氯苯氧乙酸、0.1—1mg的6‑苄基腺嘌呤、40—60g的蔗糖和6.5g的琼脂；所述MS培养基中Ⅱ的组成成分：每升MS培养基中Ⅱ中含有为0.1—1.5mg的6‑苄基腺嘌呤、0.1—1.0mg吲哚乙酸、30g的蔗糖和6.5g的琼脂%。