[发明专利]一种显示刺激隐核虫微管骨架结构的直接荧光标记方法

摘要

本发明涉及一种显示刺激隐核虫微管骨架结构的直接荧光标记方法，包括：先制备涂有多聚赖氨酸的载玻片；然后将刺激隐核虫细胞用含有皂苷的PHEM溶液渗透，加入PHEM溶液浸浴；然后将渗透后的细胞用多聚甲醛溶液固定后用PHEM溶液浸浴，再将固定后的细胞移至上述涂有多聚赖氨酸的载玻片上；吸除多余液体后向细胞上滴加Triton X-100水溶液，然后用PHEM溶液浸浴、0.01mol/L磷酸缓冲液漂洗；用含有1μmol/L荧光紫杉醇的PBS溶液于室温避光孵育后用0.01mol/L PBS缓冲液漂洗，再吸除多余的溶液，加盖盖玻片；最后用显微镜观察并照相。本发明的方法操作简单，效率高，且环保无污染。

主权项

一种显示刺激隐核虫微管骨架结构的直接荧光标记方法，包括：(1)将50‑100μL 0.5‑1.5％(V/V)多聚赖氨酸水溶液涂在洁净的载玻片上，风干，得到涂有多聚赖氨酸的载玻片；(2)吸取10‑15只刺激隐核虫细胞，将其移入盛有1mL含有0.5％(W/V)皂苷的PHEM溶液的容器中，渗透0.5‑2min；(3)吸除70‑90％步骤(2)后的溶液，然后加入0.5‑2mL PHEM溶液浸浴3‑5秒；(4)吸除70‑90％步骤(3)后的溶液，得渗透后的细胞，然后将渗透后的细胞移入盛有0.5‑2mL 4％(W/V)多聚甲醛溶液的容器中，固定10‑20秒；(5)吸除70‑90％步骤(4)后的多聚甲醛溶液，然后加入0.5‑2mL PHEM溶液，浸浴3‑5秒；(6)吸除70‑90％步骤(5)后的溶液，得固定后的细胞，再将固定后的细胞转移至步骤(1)得到的涂有多聚赖氨酸的载玻片上；(7)吸除步骤(6)后的多余液体，然后迅速向细胞上滴加0.05‑0.2mL 0.5％(V/V)Triton X‑100水溶液，处理2‑3min；(8)吸除步骤(7)后的Triton X‑100水溶液，然后向细胞上滴加0.05‑0.2mL PHEM溶液，浸浴3‑5秒；(9)吸除步骤(8)后的PHEM溶液，然后向细胞上滴加0.05‑0.2mL 0.01mol/L磷酸缓冲液PBS漂洗虫体2‑3次，每次2‑4min；(10)吸除步骤(9)后的PBS溶液，随后迅速向细胞上滴加0.01‑0.03mL含有1μmol/L荧光紫杉醇的0.01mol/L的PBS溶液，于室温避光孵育5‑15min；(11)吸除步骤(10)后的溶液，随后向细胞上滴加0.05‑0.2mL 0.01mol/L PBS缓冲液漂洗虫体2‑3次，每次2‑4min，然后吸除多余的溶液，加盖盖玻片；最后用显微镜观察并照相，其中荧光的激发波长为492nm，发射波长为520nm。