[发明专利]一种定量检测白介素8的试剂盒

摘要

本发明公开了定量检测白介素8的诊断试剂盒及其检测方法，该试剂盒包含白介素8磁分离试剂，酶标抗体，增强剂，校准品、控制品，浓缩液以及底物。本发明试剂盒采用免疫磁微粒分离技术与竞争酶联免疫技术结合，具有更高的检测灵敏度和特异性，并且大大缩短了检测时间，可以在10分钟内检测数个生物样本，对于尿液、血清等样本可以不需前处理直接进行检测。

主权项

一种定量检测白介素8的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含白介素8磁分离试剂，酶标抗体，增强剂，校准品、控制品，浓缩液以及底物；所述试剂盒按照如下方法制备而成：第一步：白介素8磁分离试剂的制备步骤：1)将1.0mg辛二酸二琥珀酰亚胺酯溶于50ul DMSO中，取2mg白介素8单克隆抗体溶于PH 9.5的0.1mol/L PB缓冲液中至总体积为1ml；2)用移液枪吸取步骤1中的辛二酸二琥珀酰亚胺酯加入到步骤1的抗体溶液中，置室温90min；3)将步骤2获得的溶液加入到浓缩管中然后放入到高速冷冻离心机中在3000g下浓缩30min至体积为0.5ml；4)取0.5ml磁珠，加入5ml反应杯中，放入试管架，经磁铁吸附2分钟后吸取上清；5)加入步骤3获得的抗体溶液，混匀后室温反应4小时；6)加入0.3ml 1mol/L的TRIS溶液37℃15分钟；7)加入1.5ml PH 7.20.1mol/L PB清洗已经标记的磁珠，混匀30秒，上架，去上清；8)用100ml磁珠保存液将磁珠转入125ml玻璃瓶；磁珠保存液配方为0.1％BSA，0.05％吐温‑20，0.02％NaN3，20％乙醇，4℃保存；9)将步骤8获得的溶液用磁珠缓冲液按照1∶1的体积比例混匀，即得磁分离试剂；所述磁珠缓冲液为浓度是1mol/L的TRIS‑HCl缓冲液。第二步：酶标抗体制备步骤：1)2.5mg白介素8单克隆抗体溶于1.0ml的N，N‑二甲基甲酰胺中，加入1ml的10mg/ml辣根过氧化物酶水溶液和1.3mg碳化二亚胺，1小时后将1.0ml 20mg/ml的碳化二亚胺加入，混合物不断搅拌，4℃过夜；2)将步骤1的溶液装入透析袋中，对0.15M的PH7.4PBS透析，4℃过夜，收集保留液；然后加入10ml浓度为15mg/ml的BSA溶液，4℃储存备用；最后将上述溶液用酶标抗体稀释液以1∶1000的体积比混合均匀，即得酶标抗体；所述酶标抗体稀释液为浓度是1mol/L的TRIS‑HCl缓冲液。第三步：增强剂配制步骤：1)称取TRIS1.56g和NaCl 4.23g于1L容器中；用移液器将Proclin‑300量取0.2ml于10ml纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入上述1L容器中；2)用量筒量取800ml纯化水于上述1L容器中，充分搅拌，直至完全溶解，调PH在7.35‑7.45之间；3)称取Mak330.9g于上述1L容器中；最后定容1000ml，完全溶解后，用0.2um滤器过滤。第四步：校准品和控制品的配制：将白介素8配制浓度分别为0.10、0.20、0.40、0.80、1.60ng/ml的校准品；将白介素8配制成浓度分别为0.20、0.80ng/ml的控制品。第五步：浓缩液配制步骤，配制1L：1)称取TRIS 12.54g和NaCl 325.6g于1L容器中；2)称取5g Tween‑20于100ml容器中加20ml水使其完全溶解后，倒入上述1L容器中；3)用移液器将Proclin‑300量取0.2ml于盛有10ml纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入上述1L容器中；4)用量筒量取800ml纯化水于上述1L容器中，充分搅拌，直至完全溶解；5)调PH，控制其范围在7.35‑7.45之间；6)最后定容1000ml，完全溶解后用0.2um滤器过滤即得。第六步：底物配制步骤，配制1L：1)称取TRIS 2.35g、NaCl 6.41g、Na2SO3 0.002g和Proclin‑3000.2ml于1L烧杯中；2)用量筒量取600ml纯化水于1L烧杯中，充分搅拌，直至完全溶解，调PH在7.95‑8.05之间；3)加入250ml Lumi‑Phos 530后，用0.2um滤器过滤收集滤液，用纯化水定容至1000ml，混匀后即得。