[发明专利]一种提取扩增单克隆间充质干细胞的方法及所用培养液

摘要

本发明公开了一种提取扩增单克隆间充质干细胞的方法及所用培养液，涉及细胞提取及培养、扩增领域，包括单个核细胞接种、挑选单克隆、细胞鉴定等步骤，还提供了相关的无血清间充质干细胞培养液的配方。本发明能够在8周的时间内无血清条件下完成单克隆间充质干细胞的筛选、规模化扩增和鉴定，最终获得的单克隆间充质干细胞制品中的细胞是原始组织中单个细胞的后代，性状高度均一，从而使间充质干细胞制品使用效果更显著、产品质量更稳定，并减少血清、杂质细胞对研究结果、受试动物或受试人体可能产生的额外影响，此外还具有投入低、易推广等优点。

主权项

一种提取扩增单克隆间充质干细胞的方法，依次包括以下步骤：(1)单个核细胞接种：从供体组织中分离出单个核细胞，根据培养容器的底部表面积，以0.5～5×10^6细胞/cm2的密度接种于间充质干细胞无血清培养液，进行培养；(2)挑选单克隆：培养到接种后3周，选取贴壁生长的由100‑150个梭形细胞组成的旋涡状单克隆细胞群落(图1)，将其挑下并接种于含有无血清培养液的培养容器中，进行培养；(3)细胞鉴定：当一个单克隆培养的细胞总数达5×10^6个细胞以上时，鉴定其是否符合间充质干细胞特征，不符合的废弃，符合的继续培养扩增或用于其他用途；通过以上步骤获得高纯度的单克隆间充质干细胞。