[发明专利]一种适用于分析复杂基质固体样品中雌激素及双酚A的前处理方法

摘要

一种适用于分析复杂基质固体样品中雌激素及双酚A的前处理方法，基于快速速溶剂萃取-液液萃取-Florisil柱净化-碱液提取-HLB柱富集净化-液相色谱/串联质谱联用(ASE-LLE-Florisil-AS-HLB-LC/MS/MS)的双酚A及雌激素的共检测方法。以丙酮∶甲醇＝1∶1(v/v)为萃取剂进行快速速溶剂提取污泥和沉积物中雌激素及双酚A，以乙腈-正己烷体系液液萃取除去油脂及多环芳烃等非极性杂质，以Florisil柱净化大部分色素后，再用0.1mol/L氢氧化钠溶液提取残渣中的雌激素及双酚A，过0.22μm滤膜后再用HLB柱进一步富集净化。本方法对双酚A及雌激素的回收率为75-100％，检测限低于0.4ng/g，净化效果良好，满足复杂基质固体样品中雌激素的检测要求。该研究结果可以快速、有效对高基质干扰的污泥、沉积物及畜禽粪便样品中雌激素及双酚A进行分离和净化，有利于提高方法的精确性和稳定性，也能降低复杂样品对仪器的损坏。

主权项

1.一种适用于分析复杂基质固体样品中雌激素及双酚A的前处理方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：(1)样品提取将采集的污泥和沉积物样品进行冷冻干燥，以丙酮/甲醇＝1∶1(v/v)为萃取剂，用快速溶剂萃取提取固体样品中的雌激素及双酚A；然后旋转蒸发浓缩至1ml左右，用氮气吹干。(2)提取液净化a.液液萃取(LLE)净化：用乙腈重新溶解残渣后，再加入正己烷漩涡混合，液液萃取去除非极性物质，重复两次弃去正己烷相，并将乙腈相氮气吹干。b.Florisil柱净化：用正己烷/二氯甲烷＝3/1(v/v)溶液重新溶解上述净化残渣，然后通过预先用正己烷活化好的Florisil柱，再用正己烷/二氯甲烷＝3/1(v/v)淋洗，以丙酮/二氯甲烷＝2/8(v/v)为洗脱剂经行洗脱，洗脱液氮气吹干。c.碱液净化(AAE)+HLB柱净化：用0.1M的NaOH溶液超声溶解Florisil净化后的残渣，然后通过0.22μm的尼龙滤头，滤液与100ml超纯水和6ml甲醇混匀后，用4mol/L的盐酸调节pH至3左右，并通过HLB柱富集净化，HLB柱经过乙酸乙酯洗脱后，洗脱液经氮气吹干后定容，待测定。(3)利用液相色谱-串联质谱仪分析雌激素及双酚A浓度色谱柱：Nova-Pak C18，3.9mm×150mm×4μm，Waters公司；离子源：电喷雾离子化源(ESI)，负离子方式检测；离子喷射电压：-4500V；温度：450℃；源内气体1(GS1)，N₂，压力：45psi；气体2(GS2)，N₂，压力：45psi；气帘气体N₂压力：20psi；扫描方式为多重反应监测(MRM)；碰撞气N₂压力：Medium。HPLC流动相梯度洗脱条件为：(4)标准曲线的绘制，以外标法进行定量测定所述的外标法标准曲线的绘制：利用分析天平准确称量3种雌激素及双酚A，溶于色谱纯乙腈内，配置成系列浓度的标准溶液，采用液相色谱-串联质谱联用进行分析，分别以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行回归，得到标准曲线，用于计算样品中分析物的量。(5)样品的测定采集待测污泥和沉积物样品，按步骤(1)对样品进行提取，再按步骤(2)进行四步净化，最后样品用于液相色谱-串联质谱联用检测，并与步骤(4)得到的标准曲线比较，通过换算最终得到待测样品中雌激素及双酚A的含量。