[发明专利]以扬麦16为受体的转基因植株快速再生的培育方法

摘要

本发明涉及一种以扬麦16为受体的转基因植株快速再生的培育方法，对转基因后的愈伤组织进行恢复培养、分化筛选、幼苗生根培养，其特征在于：在进行基因转化时同时导入bar基因或Hyg基因，在分化筛选培养基中添加与bar基因或Hyg基因对应的筛选试剂，在愈伤组织恢复培养后通过分化筛选培养基对愈伤组织进行一次分化筛选，分化的幼苗转入生根培养基，使整个转基因再生植株的培育缩短至45~60天，将在传统的小麦转基因方法中转基因再生植株获得时间由4-6个月，缩短至1个半月至2个月的时间，外源基因的转化频率在1%左右。

主权项

一种以扬麦16为受体的转基因植株快速再生的培育方法，包括基因转化，以及对转基因后的愈伤组织进行恢复培养、分化筛选和生根培养，其特征在于：在进行基因转化时同时导入bar基因或Hyg基因，在分化筛选培养基中添加与bar基因或Hyg基因对应的筛选试剂，在愈伤组织恢复培养后通过分化筛选培养基对愈伤组织进行一次分化筛选，再转入生根培养基，使整个转基因再生植株的培育缩短至45~60天，具体方法是：a) 将扬麦16幼胚在愈伤组织诱导培养基上培养5天， 在高渗培养基上培育4‑5小时，进行基因转化时同时导入bar基因或Hyg基因，再在高渗培养基上培育10‑15小时，最终完成前期的基因转化；b）基因转化后在愈伤组织诱导培养基上培养7天，再转移至分化筛选培养基；c) 在分化筛选培养基上培养15‑20天，获得转基因再生幼苗；d）再生幼苗转到生根培养基上，培养13‑16天，形成发育良好的根系，获得完整的转基因再生植株；所述的分化筛选培养基为： 1/2MS培养基+1.5 mg/L NAA +1.5 mg/L KT +20g/L蔗糖+ 3 g/L植物凝胶，PH调至6.0；其中，1/2MS培养基为MS基本培养基的大量元素、微量元素、铁盐、有机物质的含量减半；当筛选标记基因为bar基因时，分化筛选培养基中添加3 mg/L Basta；当筛选标记基因为 Hyg基因时，分化筛选培养基中添加25 mg/L的潮霉素；所述的生根培养基为：1/2MS培养基+ 1 mg/L IAA+0.5g/L麦芽提取物+20g/L蔗糖+ 3 g/L植物凝胶，PH调至6.0。