[发明专利]一种体外诱导胚胎干细胞分化成为神经细胞方法无效
| 申请号： | 201110217426.9 | 申请日： | 2011-07-29 |
| 公开（公告）号： | CN102899285A | 公开（公告）日： | 2013-01-30 |
| 发明（设计）人： | 孙燕;彭裕文;张素春;李瑞锡 | 申请（专利权）人： | 复旦大学 |
| 主分类号： | C12N5/0735 | 分类号： | C12N5/0735;C12N5/10;A61K35/12;A61P25/00 |
| 代理公司： | 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268 | 代理人： | 吴桂琴 |
| 地址： | 20043*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明属于生物医学领域，涉及一种体外诱导胚胎干细胞分化成为神经细胞方法，尤其涉及嘌呤衍生物Purmorphamine诱导Olig2+-GFP+-mES的神经细胞分化的方法及其用途。本发明采用拟胚体介导的神经诱导法，以Olig2-GFP+-mES作为细胞模型，以嘌呤衍生物Purmorphamine结合全反式维甲酸定向诱导所述的Olig2-GFP+-mES细胞分化为脊髓运动神经元和少突胶质前体细胞；经实验证实，所述的Purmorphamine可作为SHH的替代物，有效地诱导Olig2+-GFP+-mES分化为高纯度、有功能的脊髓运动神经元和少突胶质细胞，并引起相关基因表达改变；移植实验结果证实，所诱导的神经细胞能促进大鼠脊髓损伤后功能和形态的部分恢复，具有促进脊髓损伤后再生和功能重建的作用。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 体外 诱导 胚胎 干细胞 分化 成为 神经细胞 方法 | ||
【主权项】：
一种体外诱导胚胎干细胞分化成为神经细胞方法，其特征在于，采用拟胚体介导的神经诱导法，以Olig2‑GFP+‑mES作为细胞模型，以嘌呤衍生物Purmorphamine结合全反式维甲酸定向诱导所述的Olig2‑GFP+‑mES细胞分化为脊髓运动神经元和少突胶质前体细胞；包括下述步骤：①将Olig2+‑GFP+‑mES放入含有白血病抑制因子LIF的胚胎干细胞培养基悬浮培养2天；②放入含有全反式维甲酸RA和嘌呤衍生物Purmorphaine的神经分化培养基中培养4天；③放入含有bFGF的神经分化培养基分别培养2天和6天，采用荧光激活的细胞筛选Olig2+‑GFP+‑阳性细胞；④分别在神经元培养基和少突胶质细胞培养基继续培养，诱导生成脊髓运动神经元和少突胶质细胞。
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