[发明专利]一种培养坐骨神经许旺细胞的方法无效
| 申请号： | 201110216913.3 | 申请日： | 2011-07-29 |
| 公开（公告）号： | CN102899290A | 公开（公告）日： | 2013-01-30 |
| 发明（设计）人： | 王晓盼;沈尊理;秦金保;金羽青 | 申请（专利权）人： | 上海市第一人民医院 |
| 主分类号： | C12N5/079 | 分类号： | C12N5/079;A61L27/38 |
| 代理公司： | 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268 | 代理人： | 吴桂琴 |
| 地址： | 200080*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明属于细胞生物学领域，涉及一种培养成年小鼠坐骨神经许旺细胞的方法。本发明还包括经过纯化过程获得更高的纯度的许旺细胞的方法。获得的许旺细胞纯度达到91％，再纯化后其纯度高达98％，结果表明，由于体外的预变性促进了许旺细胞的增殖从而抑制了成纤维的增值，能获得有较高的纯度的许旺细胞。本发明方法通过体外预变性的坐骨神经培养及纯化步骤，能简单、有效的获取大量、高纯度的许旺细胞，为损伤神经修复提供了丰富、优质的许旺细胞，可用于在组织工程中作为神经种子细胞。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 培养 坐骨神经 细胞 方法 | ||
【主权项】：
一种培养成年小鼠坐骨神经许旺细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将获取的神经段分别置于DMEM+10％FBS、许旺细胞培养液(SCCM)中，5％CO2，37℃培养箱中，孵育，进行预变性，每隔3天换液一次；(2)一周后吸除培养液，剪碎处理上述神经段，用3‑20倍组织量的质量体积比为0.05～0.3％的消化酶溶液消化神经组织碎块45～90分钟；(3)将步骤(2)得到的混悬液用吸管反复吹打3～5分钟，获得解离的细胞；(4)对步骤(3)解离的细胞在600‑1500g离心3‑10分钟，弃上清，得到细胞团块；(5)用许旺细胞培养液(SCCM)重悬步骤(4)得到的细胞，以1x104‑5x104个/cm2接种于纤维粘连蛋白包被的培养皿，获得许旺细胞。
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