[发明专利]一种以重楼芽鞘为外植体的愈伤组织诱导方法

摘要

本发明公开了一种以重楼芽鞘为外植体的愈伤组织诱导方法，该方法是先将重楼根茎上将萌发的隐芽进行消毒和预培养，再选取预培养后体积明显膨大的芽体的白色内层芽鞘作为外植体接入愈伤组织诱导培养基MS+6-BA0.5～2.0mg·+NAA0.5～4mg·L-1+椰汁20～80mg·L-1+蔗糖30～50g·L-1+琼脂6.0～7.0g·L-1中进行培养，培养50～60天后，外植体表面即长出白色或黄白色的质地紧密的愈伤组织。本发明较好的解决了重楼传统生产方法中存在的生长时间长、成本高等问题，可有效缓解当前重楼药材短缺现象。

主权项

一种以重楼芽鞘为外植体的愈伤组织诱导方法，其特征在于包括如下步骤：(1)选取重楼根茎上将萌发的隐芽，先将隐芽用自来水冲洗干净，然后阴干，再在超净台用浓度为70％～75％的酒精消毒10～60s，接着用浓度为0.1％～0.15％的升汞消毒4～10min，最后用无菌水震荡洗3～6次，洗后用已灭菌的滤纸反复吸干隐芽表面的水分；(2)将消毒处理后的隐芽接种于培养基MS+6‑BA1.0～3.0mg·L‑1+椰汁0～100mg·L‑1+蔗糖30～50g·L‑1+琼脂6.0～7.0g·L‑1中进行预培养，所采用的pH值为5.5～6.0，培养温度16～20℃、每天光照6～10小时、光照强度为1000～1500lx；(3)选取预培养后体积明显膨大的芽体，在超净工作台上先剥去其外层芽鞘，再将其白色内层芽鞘作为外植体接入愈伤组织诱导培养基MS+6‑BA0.5～2.0mg·+NAA0.5～4mg·L‑1+椰汁20～80mg·L‑1+蔗糖30～50g·L‑1+琼脂6.0～7.0g·L‑1中进行培养，所采用的培养基pH值为5.5～6.0，培养温度为16～26℃、每天光照8～12小时、光照强度为1200～1800lx，培养50～60天后，外植体表面上长出的白色或黄白色物即为愈伤组织。