[发明专利]一种黑水缬草愈伤组织再生植株的方法

摘要

一种黑水缬草愈伤组织再生植株的方法，它涉及一种黑水缬再生植株的方法。它解决了黑水缬草数量稀少、繁殖周期长、增殖效率低的问题。方法：一、黑水缬草种子处理后经培养获得幼苗；二、幼苗经培养获得无菌苗；三、无菌苗的新生嫩叶剪切后经培养，获得愈伤组织，再进行继代培养获得不定芽；四、将不定芽连同基部的愈伤组织一起切下，经培养获得小植株；五、将小植株从基部切下，然后在激动素中浸泡，经培养后形成完整植株即完成。本发明配方简单，操作工艺简便，培养周期短，扩繁系数大(每1个月增殖7.5～9.5倍)，再生频率高，成本低，有利于大规模生产。

主权项

一种黑水缬草愈伤组织再生植株的方法，其特征在于黑水缬草愈伤组织再生植株的方法按以下步骤实现：一、黑水缬草种子经冷冻预处理后进行消毒，然后接种到添加7g/L琼脂的1/2MS培养基上，在温度为24～26℃、湿度为60％～80％、光照强度为3000lux、每天光照16h的条件下培养30～37天，获得幼苗；二、将长度为2cm的幼苗接种到添加7g/L琼脂的MS培养基上，在温度为24～26℃、湿度为60％～80％、光照强度为3000lux、每天光照16h的条件下培养1～3个月，获得无菌苗；三、取无菌苗的新生嫩叶剪切成直径1cm的圆片，然后接种到添加2.0mg/L2，4‑D、0.15mg/L激动素、30g/L蔗糖和7g/L琼脂的MS培养基上，在温度为24～26℃、湿度为60％～80％、每天光照16h的条件下培养5～28天，获得愈伤组织，再更换新鲜培养基进行继代培养，经过5～6次继代培养后，将愈伤组织转接到MS培养基中，在25℃、60r/min、每10天更换新鲜的MS培养基条件下摇瓶继代培养4周，获得不定芽；四、将形成的不定芽连同基部的愈伤组织一起切下，然后接种到添加0.5mg/L萘乙酸、1.5mg/L激动素和30g/L蔗糖的MS培养基中，在温度为24～26℃、湿度为60％～80％、每天光照16h的条件下培养4周，获得小植株，长度为4～5cm；五、将小植株从基部切下，然后在10mg/L激动素中浸泡小植株基部，再接种到添加0.5mg/L萘乙酸、1.5mg/L激动素和30g/L蔗糖的MS培养基中，在温度为24～26℃、湿度为60％～80％、每天光照16h的条件下培养4周形成完整植株，即完成黑水缬草愈伤组织再生植株。