[发明专利]用双指示线免疫层析半定量诊断甲胎蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种生物工程技术领域的检测方法，具体是一种用双指示线免疫层析半定量诊断甲胎蛋白的方法。甲胎蛋白是一种由胚胎细胞和卵黄囊产生的胎儿所特有的蛋白质。正常成人血清中AFP含量极微(＜20ng/ml)，当肝细胞恶变时，含量可大大升高(＞400ng/ml)。因此检测血清中AFP含量的异常增高，作为早期发现和早期诊断原发性肝癌在临床上是非常有效的判定依据。目前，临床上常用的AFP检测的方法为ELISA，CLIA等方法。上述方法费时、费力、不利于普及而且费用昂贵。免疫胶体金技术近年来发展迅速，得到了广泛应用，如传染病、早孕、癌症等的检测。本发明采用胶体金免疫层析法，建立快速检测AFP的方法，并且能够半定量检测20ng/mL～400ng/mL这一AFP灰区范围。

主权项

一种用双指示线免疫层析半定量诊断甲胎蛋白的方法，其特征在于，采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记抗AFP单克隆抗体1并均匀涂布于胶体金垫上，作为示踪标记物。在硝酸纤维素膜上，两个不同浓度的AFP单克隆抗体2固定于两个检测线(即T线)，羊抗鼠二抗固定于质控线(即C线)。依次将样本垫、胶金垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸组装，剪成胶体金试纸并装入检测卡中。金标抗体与相应的抗原、抗体发生特异性结合被截留而显色，根据T线、C线显色与否来判断阴阳性结果。