[发明专利]一种检测巴曲酶活性的方法

摘要

本发明公开了一种快速、特异性地测定巴曲酶活性的方法，采用生色底物法，使用酶标仪，在一定反应时间和一定活力的标准品范围内获得线性反应曲线，建立产物吸光值和巴曲酶量的线性关系，据此计算样品的相应酶活。此外，还对该标准曲线的回收率和精密度做了仔细研究，该方法准确度高，步骤简单，成本较低，适用于巴曲酶原料及蛇毒血凝酶类制剂的质量控制。

主权项

一种检测巴曲酶活性的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)配制pH＝7.5，浓度为0.02M的Tris‑HCl缓冲液A；(2)用(1)步制备的缓冲液将巴曲酶生色底物S‑2238配制成溶液B；(3)用(1)步制备的缓冲液将降纤酶标准品配制成系列不同活性单位的母液C；(4)用(1)步制备的缓冲液将待测巴曲酶样品稀释成溶液D；(5)将系列不同活性单位的标准品母液C与待测样品溶液D分别加到酶标板不同孔中，再向每孔中补充溶液A和相同体积的溶液B，保持每孔溶液的总体积一致，孔内溶液混合混匀，放入预热至37℃的酶标仪中反应，分别测定每孔中酶解产物对硝基苯胺(PNA)的吸光度A405，并根据测定得到的不同浓度标准品母液吸光度A405值，绘制标准品的活性单位‑吸光度线性标准曲线，上述标准品母液C及待测巴曲酶样品溶液D活性单位为Bu；(6)将测定的巴曲酶样品吸光度A405值，代入(5)步得到的酶活性标准曲线，确定待测巴曲酶样品的活性。