[发明专利]家蚕中部丝腺细胞合成分泌狂犬病病毒核蛋白的方法有效
| 申请号： | 201110123586.7 | 申请日： | 2011-05-13 |
| 公开（公告）号： | CN102242147A | 公开（公告）日： | 2011-11-16 |
| 发明（设计）人： | 周继勇;钟伯雄;颜焰;危浩;阮系真;庄兰芳;郑育良 | 申请（专利权）人： | 浙江同点生物科技有限公司;浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;A01K67/04 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 林怀禹 |
| 地址： | 310018 浙江省杭州市江干区*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种家蚕中部丝腺细胞合成分泌狂犬病病毒核蛋白的方法。先构建家蚕合成分泌狂犬病病毒核蛋白RVNP的载体pBSer1RVNP-A3EGFP质粒，再利用显微注射转基因家蚕技术将这种质粒与能够提供转座酶的辅助质粒一起导入到家蚕突变品种丝胶蚕已解除滞育的受精卵内，依靠piggyBac转座子的转座特性，使绿色荧光蛋白基因和狂犬病病毒核蛋白基因导入到丝胶蚕的基因组内，并得到稳定遗传和表达，从而创制成一种能够在家蚕中部丝腺细胞特异性合成分泌狂犬病病毒核蛋白的转基因家蚕。 | ||
| 搜索关键词： | 家蚕 中部 腺细胞 合成 分泌 狂犬病 病毒 核蛋白 方法 | ||
【主权项】：
一种家蚕中部丝腺细胞合成分泌狂犬病病毒核蛋白的方法，其特征在于该方法的步骤如下：（1）采用分子生物学技术构建家蚕合成分泌狂犬病病毒核蛋白的载体pBSer1RVNP‑A3EGFP质粒；（2）采用显微注射转基因家蚕方法将pBSer1RVNP‑A3EGFP质粒及能够提供转座酶trans的辅助质粒导入家蚕已解除滞育的受精卵内，蚕卵孵化后饲养至成虫，自交续代为G1代，在G1代转基因家蚕的小蚕期，通过荧光体视显微镜观察选择表达EGFP标志基因的转基因家蚕，饲养至成虫自交续代为G2代，G2代以后均采用蛾区育，成虫自交续代，再经1‑3代选种，每代采用转基因昆虫荧光基因表达相对量无损伤测定方法，以表达EGFP标志基因及丝胶蚕性状为留种筛选标志，育成中部丝腺细胞能够合成分泌狂犬病病毒核蛋白、基因纯合的转基因家蚕新品种。
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