[发明专利]一种具鞘微鞘藻的纯化分离方法

摘要

本发明公开了具鞘微鞘藻的纯化分离方法。在荒漠中取藻结皮，用PVC管取样运回实验室进行培养；取藻结皮在已灭菌培养皿中用无菌蒸馏水浸泡后，在体式显微镜下将具鞘微鞘藻藻体剥离并挑出，取出的藻体在显微镜下观察鉴定，确定是具鞘微鞘藻后将其放入无菌培养皿中；将具鞘微鞘藻藻体经研磨、稀释后，在体式显微镜下用巴斯德吸管将所观察到的单根藻丝迅速吸出，在BG11固体培养基中进行培养。培养2-3周后，在长出的具鞘微鞘藻藻落中用无菌镊子取出在显微镜下镜检后，如无污染，即可转移到已灭菌的BG11液体培养基中。本发明解决了具鞘微鞘藻的纯化分离问题，对应用于沙漠生物结皮和防风固沙提供可行的生物材料，具有广阔的应用领域。

主权项

一种具鞘微鞘藻的纯化分离方法，其特征在于，所述的具体培养步骤包括：(1)取样：准备直径是20cm，高10cm的PVC管，在荒漠环境中取发育良好的藻结皮，用PVC管取样，底部用铁片和胶带封住，运回实验室；(2)室内培养：将采集的藻结皮置于光照培养架上进行培养备用，培养条件，光照强度36‑54μmol·m‑2·s‑1，光照/黑暗时间是14h/10h；(3)灭菌：将接种所用到的镊子、解剖针、培养皿、研钵、载玻片、盖玻片、双凹载玻片、巴斯德吸管和无菌蒸馏水一并灭菌，制备无菌BG11固体培养基并将其倒入固体培养皿；(4)藻丝挑取：取藻结皮，先用无菌蒸馏水浸泡1h，然后将藻结皮放入已灭菌培养皿中，加无菌蒸馏水使藻结皮能完全浸泡，将培养皿置于体式显微镜下，用无菌尖头镊子和解剖针将一些具鞘微鞘藻藻体与藻结皮剥离并挑出，放进另一个无菌培养皿中，并加5‑10ml无菌蒸馏水；(5)藻体鉴定：将取出的藻体放在载玻片上制成临时装片，在显微镜下观察鉴定，确定是具鞘微鞘藻后将其放入无菌培养皿中；(6)研磨：将具鞘微鞘藻藻体转移至灭菌的研钵中，加3‑5ml无菌蒸馏水，轻微研磨，将藻丝和胶鞘分离开来，形成均匀的藻液；(7)接种：取1ml藻液，用无菌蒸馏水稀释10倍，按照通常一滴为50μl计，用移液器吸取一滴至已灭菌双凹载玻片上，再加0.5ml无菌蒸馏水稀释，反复稀释几次，直至载玻片凹槽中含2‑5根藻丝，然后取一滴至另一凹槽内，用巴斯德吸管在酒精灯上烧热拉成极细的针头；将另一凹槽的藻液移至体式显微镜的视野中，将显微镜调至最高倍，在视野中找到一根藻丝；然后将巴斯德吸管装上胶头，把吸管的针头移至视野中藻丝上方，将所观察到的藻丝迅速吸出，转移到盛有BG11固体培养基的平板中；其余稀释的藻液可吸取0.5ml转移至其它固体培养基平板中；最后将培养皿用parafilm封口，在光照培养箱内培养，培养条件：光照强度是50μmol·m‑2·s‑1，温度为25℃，光照/黑暗时间是16h/8h；(8)转移培养基：培养2‑3周后，在长出的具鞘微鞘藻藻落中用无菌镊子取出，制成临时装片，在显微镜下进一步观察，无污染的藻类和细菌，即可转移到已灭菌的BG11液体培养基中；如有污染，应重复上述步骤(6)、(7)，进一步纯化。