[发明专利]Exendin-4偶联超顺磁性氧化铁纳米颗粒制法及用途

摘要

本发明公开了一种Exendin-4偶联的超顺磁性氧化铁纳米颗粒的制备方法，其采用高温水解金属醇盐螯合物过程制备出SPIO纳米颗粒，应用APS对SPIO进行硅烷化修饰及PEG对APS-SPIO颗粒进行表面包被，得到PEG-SPIO，进一步采用NHS/EDC方法将exendin-4偶联于PEG-SPIO上，从而得到具有beta细胞靶向性的纳米材料SPIO-exendin4。采用本发明方法制备而得的SPIO-exendin4能用于胰岛素瘤的靶向显像，并可提高SPIO对beta细胞的标记效率。

主权项

1.Exendin-4偶联的超顺磁性氧化铁纳米颗粒的制备方法，其特征是依次进行以下步骤：1）、在惰性气体的保护下，于室温中将FeCl₃6H₂O和FeCl₂4H₂O溶解于聚乙二醇600中，得到黄褐色溶液；所述FeCl₃6H₂O与FeCl₂4H₂O的摩尔比为2:1，FeCl₃6H₂O在黄褐色溶液中的浓度为0.01～0.1M；2）、在惰性气体的保护下，将步骤1）所得的黄褐色溶液升温至120～140℃，然后加入去离子水和2,2'-(乙烯二氧)双(乙胺)，在120～140℃保温30～60分钟，得黑色悬浮液；所述去离子水与FeCl₃6H₂O的摩尔比为30～10：1，2,2'-(乙烯二氧)双(乙胺)与FeCl₃6H₂O的摩尔比为200～400：1；3）、将步骤2）所得的黑色悬浮液冷却至室温，加入甲苯离心，去除上清液，得到棕色的氧化铁纳米颗粒；所述甲苯与黑色悬浮液的体积比为1～3：1；4）、在惰性气体保护下，将步骤3）所得的氧化铁纳米颗粒分散于甲苯中，使氧化铁纳米颗粒的浓度为0.005～0.05M；然后在搅拌的情况下，加入3-(三甲氧基甲硅烷基)-1-丙胺和钛酸丁酯，加热至70～90℃，回流反应10～16小时；3-(三甲氧基甲硅烷基)-1-丙胺与氧化铁纳米颗粒的摩尔比为5～30：1，钛酸丁酯与氧化铁纳米颗粒的摩尔比为1～5：1；5）、将步骤4）反应结束所得的溶液冷却至室温并离心分离，用甲苯清洗，得到APS-SPIO；将所述APS-SPIO分散于甲苯中，使APS-SPIO的浓度为0.005～0.05M；然后于室温中在超声及机械搅拌下，加入双羧基PEG和二环己基碳二亚胺，反应3～5小时后，所述双羧基PEG与APS-SPIO的摩尔比为1～5：1，二环己基碳二亚胺与APS-SPIO的摩尔比为5～20：1；上述反应结束后，再加入2,2'-(乙烯二氧)双(乙胺)，于室温中在超声及机械搅拌的条件下继续反应3～5小时；所述2,2'-(乙烯二氧)双(乙胺)与APS-SPIO的摩尔比为1～5：1；6）、将步骤5）所得的产物离心，用乙醇和去离子水清洗，得到PEG-SPIO，并分散于磷酸盐缓冲溶液中，得到PEG-SPIO的PBS溶液；所述PEG-SPIO的PBS溶液中Fe元素浓度为3~7毫克/毫升；7）、将摩尔比1:2.5的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与N-羟基琥珀酰亚胺混合，得混合物；取步骤6）所得的部分的PEG-SPIO的PBS溶液加入exendin-4水溶液和上述混合物，于常温下搅拌反应8~12小时，从而使exendin-4通过表面的羧基与PEG-SPIO表面的氨基通过缩水反应连结到PEG-SPIO表面；再通过超滤，最终得到的SPIO-exendin4；所述exendin-4与Fe元素的质量比为0.5～1.5：1，PEG-SPIO与EDC的摩尔比为1：2～4。