[发明专利]AaPMT和AaTRI双基因共转化提高三分三毛状根中托品烷生物碱含量的方法

摘要

本发明是一种生物工程技术领域的提高三分三毛状根中托品烷生物碱含量的方法。本发明利用从药用植物三分三根部克隆得到的限速酶基因AaPMT和AaTRI基因的编码框序列构建含AaPMT和AaTRI基因的植物双价高效表达载体，通过发根农杆菌为介导，对三分三外植体进行双基因转化，从而获得转AaPMT和AaTRI基因的三分三毛状根，其中托品烷生物碱的平均含量明显提高。本发明提供了一种提高三分三毛状根托品烷生物碱含量的方法，从而为临床所需求的托品烷生物碱提供了更多的来源和巨大的商业需求。

主权项

AaPMT和AaTRI双基因共转化提高托品烷生物碱含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将腐胺N‑甲基转移酶基因AaPMT和托品酮还原酶I基因AaTRI，插入植物表达载体，构建重组载体；所述的腐胺N‑甲基转移酶基因和托品酮还原酶I基因序列分别为SEQ ID：1和SEQ ID：2的DNA序列；(2)将步骤(1)所获得的重组载体转入发根农杆菌，构建含有重组载体的发根农杆菌；(3)用步骤(2)所得含有重组载体的发根农杆菌介导腐胺N‑甲基转移酶基因和托品酮还原酶I基因转化三分三，获取毛状根；(4)检测步骤(3)毛状根中的腐胺N‑甲基转移酶基因和托品酮还原酶I基因，取筛选结果为阳性的转基因毛状根。