[发明专利]牛奶中三聚氰胺含量的纳米磁珠检测方法

摘要

本发明公开了一种牛奶中三聚氰胺含量的纳米磁珠检测方法，利用纳米磁珠对过氧化氢和酶底物反应的催化作用，在研究比较四种自制纳米磁珠模拟酶催化特性的基础上，建立了基于Fe3O4-H2O2-TMB反应体系的牛奶中微量三聚氰胺定性与半定量快速检测新方法，牛奶样品中三聚氰胺的浓度对数与吸光度值呈显著的线性相关关系，直线回归方程为Y＝-0.3087X+1.401，下建立的牛奶中三聚氰胺Fe3O4纳米磁珠检测方法，具有检测时间短、成本低、稳定性好、检测试剂易回收和反复使用等优点，在实时、灵敏地检测三聚氰胺中具有重要的应用前景。

主权项

一种牛奶中三聚氰胺含量的纳米磁珠检测方法，其特征在于：其具体步骤为：1)分别取5.2g FeCl3·6H2O和2.7969g FeSO4·7H2O以及12.1M的浓盐酸0.85mL溶解于200mL H2O中，超声脱氧，然后将以上溶液滴加到250mL，0.75M NaOH溶液中；所述反应温度为80℃，磁力搅拌进行；2)取25mL上述磁性纳米颗粒溶液，加入1mL水，再用乙醇稀释到150mL，超声振荡30分钟，滴加0.4mL APTES(或PEG、Dextran)，室温下搅拌7小时。反应完毕，用磁分离器将纳米颗粒从反应介质中分离，并用乙醇溶液清洗3次，配成不同类型的Fe3O4纳米磁珠溶液；3)在1mL底物缓冲液，10μL H2O2，10μL磁性纳米颗粒，温度为20℃，pH值为6的条件下，分别添加10、20、50、100、150、200、250和300μL TMB于反应体系中，测定不同TMB用量对磁性纳米颗粒类酶活性的影响；在1mL底物缓冲液，200μLTMB，10μL磁性纳米颗粒，温度为20℃，pH值为6的条件下，分别添加5、10、15、20、25、和30μL H2O2于反应体系中，测定不同H2O2用量对磁性纳米颗粒类酶活性的影响；4)根据上述结果，按1mL缓冲液，200μL TMB，20μL双氧水和10μL磁性纳米颗粒设置反应体系，用HCl或者NaOH来调节反应pH值在3‑9，温度4‑60℃，反应时间1‑8min，研究反应条件对磁性 纳米颗粒类酶活性的影响；5)将不同浓度的三聚氰胺储备液(甲醛溶解)分别加入本身不含三聚氰胺的2mL牛奶或1g奶粉中，使其中三聚氰胺的浓度分别为1、5、50、100、500、1000mg/kg，然后在1mL缓冲液中，依次加入200μL三聚氰胺、20μL双氧水混匀1min，再加入200μL TMB和10μL Fe3O4纳米磁珠，6min后中止反应，用紫外分光光度计测定其吸光度。