[发明专利]一种以铬离子为标准毒性物质评价水质健康风险的方法

摘要

一种以铬离子为标准毒性物质评价水质健康风险的方法，包括，进行生物鱼毒性试验，若96h内有死鱼，以Cr6+浓度表示水质毒性，如无死鱼进行发光菌毒性试验；若发光抑制率高于40%，以Cr6+浓度表示水质毒性，若低于40%，进行SOS/umu测试；若为阳性反应，以Cr6+浓度表示水质毒性，若为阴性反应，进行蚕豆根尖微核试验；若微核千分率比值大于1.5，以Cr6+浓度表示水质毒性，若小于等于1.5，进行单细胞凝胶电泳试验，以Cr6+浓度表示水质毒性。本发明环环相扣，使水质中污染物含量无论高低都能进行检测，且检测时间较短，结果准确、易于统一，实现了对水质毒性的定量化评价。

主权项

一种以铬离子为标准毒性物质评价水质健康风险的方法，其特征是包括以下步骤：（1）生物鱼毒性试验将待测水样进行生物鱼毒性试验，测定96小时内生物鱼的死亡率；若96小时内有死鱼现象，则将生物鱼放入不同浓度的铬离子溶液中进行生物鱼毒性试验，在 24 h、48 h、72 h、96 h后检查生物鱼的死亡率，得24 h、48 h、72 h和96 h 的Cr6+对死亡率的标准曲线，将待测水样的死亡率代入相应的标准曲线，以Cr6+浓度表示该水样的水质毒性；若96h内无死鱼现象，则将待测水样按照步骤（2）的方法进行发光细菌毒性试验； （2）发光菌毒性试验将待测水样与发光菌菌悬液1:1体积比混合，进行发光菌毒性试验，测得待测水样的发光抑制率，所述发光菌为青海弧菌；若发光抑制率高于40%，则将发光菌菌悬液与不同浓度Cr6+溶液进行发光菌毒性试验，得不同浓度Cr6+的发光抑制率，绘制Cr6+对发光抑制率的标准曲线，将待测水样的发光抑制率代入标准曲线，以Cr6+浓度表示该水样的水质毒性；若待测水样的发光抑制率低于40%，则将待测水样按照步骤（3）的方法进行SOS/umu测试；（3）SOS/umu测试将携带绿色荧光蛋白的大肠杆菌培养成OD值为0.3‑0.5的大肠杆菌检测液，将检测液与待测水样接触，同时设立空白样作为对照，然后收集细胞、超声破碎菌体，分别测定待测水样与空白样的荧光强度； 若待测水样与空白样的荧光强度之比大于1.5，为阳性反应，则记录待测水样与空白样的荧光强度比值，同时将大肠杆菌检测液与不同浓度的Cr6+溶液进行接触，并设立空白样作为对照，测得不同浓度Cr6+与空白样的荧光强度，记录不同浓度Cr6+与空白样的荧光强度比值，绘制荧光强度比值对Cr6+浓度的标准曲线，将待测水样的荧光强度比值代入标准曲线，以Cr6+浓度表示该水样的水质毒性；若待测水样与空白样的荧光强度之比小于等于1.5，为阴性反应，则将待测水样按照步骤（4）的方法进行蚕豆根尖微核试验；（4）蚕豆根尖微核试验以松滋青皮豆为指示生物，通过浸种、催芽，得初生根为1.5cm～2cm长的松滋青皮豆种子，用待测水样对种子进行处理，同时设立空白样作为对照组，处理后通过根尖细胞修复培养、固定、染色，在生物显微镜下对根尖细胞进行镜检，计算待测水样和对照组处理的细胞微核千分率；若待测水样的微核千分率与对照组的微核千分率的比值大于1.5，则用不同浓度的Cr6+溶液对根为1.5cm～2cm长的松滋青皮豆种子进行处理，处理后通过根尖细胞修复培养、固定、染色，在生物显微镜下对根尖细胞进行镜检，计算不同Cr6+浓度处理的细胞微核千分率，绘制Cr6+浓度对细胞微核千分率的标准曲线；将待测水样的细胞微核千分率代入标准曲线，以Cr6+浓度表示该水样的水质毒性；若待测水样的微核千分率与对照组的微核千分率的比值小于等于1.5，则将待测水样按照步骤（5）的方法进行单细胞凝胶电泳试验；（5）单细胞凝胶电泳试验用不同浓度的Cr6+溶液对小老鼠分别进行染毒处理，然后将被不同浓度Cr6+染毒的小白鼠脾脏的淋巴细胞分别进行单细胞凝胶电泳试验，经制备单细胞悬浮液、制作电泳胶板、细胞裂解、DNA解旋、电泳、中和、染色、镜检与分析等步骤后，用CASP软件分析测量不同浓度Cr6+染毒的DNA迁移的各种参数，绘制Cr6+对olive尾距的标准曲线，将浓缩富集的待测水样用同样的方法进行单细胞凝胶电泳试验，测得待测水样处理后的olive尾距，将待测水样所得的olive尾距代入Cr6+对olive尾距的标准曲线，即可得到Cr6+浓度表示的待测水样的水质毒性。