[发明专利]一种艾滋病检测质控血清的配制方法

摘要

本发明公开了一种艾滋病检测质控血清的配制方法，该方法是一种通过两步稀释法确定稀释倍数的临界值质控血清的配制新方法，该方法简单易行，减少步骤和各种损耗，并且减少反复摸索稀释的盲目性和不可控性。

主权项

一种艾滋病检测质控血清的配制方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：（1）选择阳性血清：所选用HIV阳性血清样本需经ELISA检测为强阳性，并经Western Blot确证；（2）选择和处理阴性血清选用正常人血清，该血清为HIV抗体阴性、HBsAg阴性、HCV抗体阴性，并且无肉眼可见的溶血、黄疸、乳糜颗粒、絮状沉淀物；将上述阴性血清灭活补体，除菌备用； （3）最终稀释倍数的确定：a. 第一步稀释用处理后阴性血清对HIV阳性血清进行10，100，1000……10×梯度稀释，并对各稀释样本进行ELISA检测，测得各样本的OD值，找出样本OD值相对于原阳性血清出现明显下降的稀释倍数，即该稀释倍数为第一步稀释倍数，该样本作为下步稀释的母液；b. 第二步稀释对上步获得的母液再进行2, 4, 8……2×系列稀释，并对各稀释样本进行ELISA检测，测得各样本的OD值，计算出S/CO值和反应OD值，确定第二步稀释倍数，具体方法为：当2×系列稀释的样本中某一稀释倍数样本获得的S/CO值恰巧为所需配制的数值，直接采用该稀释倍数为第二步稀释倍数； 当2×系列稀释的样本中S/CO值没有出现所需配制的数值，则进行以下计算：(ⅰ) 选一个OD值在2.0以下，S/CO值最接近所需配制数值的稀释倍数，上下均可；(ⅱ) 计算所选稀释倍数的反应OD值，所述反应OD值=该稀释倍数对应的样本OD值‑阴性对照OD值；(ⅲ) 计算所需配制S/CO值的质控血清的反应OD值，所述反应OD值=所需配制的S/CO值×cutoff值‑阴性对照OD；(ⅳ) 根据以下公式计算第二步稀释倍数:X2=X1*Y1/Y2 其中，X2：第二步稀释倍数X1：步骤(ⅰ)中所选的S/CO值最接近所需配制数值的稀释倍数Y1：步骤(ⅱ)所得的反应OD值Y2：步骤(ⅲ)所得的反应OD值c. 最终稀释倍数=第一步稀释倍数×第二步稀释倍数；（4）稀释分装将选定的阳性血清和阴性血清，按照步骤（3）确定的最终稀释倍数在无菌条件下进行稀释，稀释后搅拌过夜，充分混匀，分装于冻存管中备用。