[发明专利]人结肠癌移植瘤小鼠模型的建立方法

摘要

本发明公开的人结肠癌移植瘤小鼠模型的建立方法，其将人新鲜结肠癌标本接种于BALB/c-nu/nu裸小鼠及BNX小鼠皮下，反复传代5代。分别建立BNX小鼠及裸鼠皮下移植瘤，观察生长情况，绘制生长曲线。利用皮下移植瘤组织建立原位移植瘤结肠癌模型，观察成瘤情况及转移情况。移植瘤组织石蜡包埋切片，比较光镜下与原结肠癌组织有无组织学差异，免疫组织化学检测石蜡切片ESA，CEA，C-erbB-2，P53在皮下瘤的表达，流式细胞技术检测该肿瘤的细胞周期及倍体。本发明利用人结肠癌组织成功建立结肠癌皮下及原位移植瘤模型，该模型生物学稳定，保持了原代肿瘤的特点。

主权项

一种人结肠癌移植瘤小鼠模型的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)小鼠皮下移植瘤模型的建立(2.1)将肿瘤组织放置在含庆大霉素的生理盐水中浸泡2min，取出组织，反复用生理盐水冲洗三分钟，冲洗后标本组织无血液，将肿瘤组织用无菌眼科剪分割成直径1.5mm大小，放在无菌培养皿中；(2.2)用20号套管针把剪好的肿瘤组织分别移植到裸小鼠及BNX小鼠右侧背部近腋部皮下，压迫伤口，无出血。每次套管针在电热真空灭菌器中灭菌；(2.3)将小鼠放入小鼠IVC系统饲养；(2.4)等待肿瘤形成约15mm左右，无菌切除皮下肿瘤，选择实性肿块，取材剪成1.5mm3小块，移植于另外小鼠，传三代；(3)结肠癌原位模型的建立(3.1)利用实验二所获得的第四代裸小鼠皮下移植瘤作为瘤源，将肿瘤组织放置在含庆大霉素的生理盐水中浸泡2min，取出组织，反复用生理盐水冲洗3min，冲洗后标本组织无血液，将肿瘤组织用无菌眼科剪分割成直径1.5mm大小，放在无菌培养皿中备用；(3.2)裸小鼠8只，禁食12h，3％戊巴比妥溶液麻醉裸小鼠；(3.3)将小鼠仰卧固定于操作台上，75％酒精消毒皮肤；(3.4)取腹部正中切口，寻找到盲肠，钳出盲肠，于盲肠末端用手术刀背轻轻划破浆膜面，用无齿镊将盲肠末端向内推压，使局部形成壁龛，将直径1.5mm的肿瘤组织塞入壁龛内，表面滴生物蛋白胶，使胶覆盖瘤体表面，与盲肠粘合好，将盲肠回纳入腹腔，3‑0可吸收线连续缝合关腹；(3.5)伤口再次消毒后进入IVC系统饲养；(4).观察项目(4.1)分别记录每一次皮下移植瘤小鼠肿瘤生长情况及成瘤率，皮下移植瘤等待肿瘤生长到1.5mm时，取第四代裸小鼠皮下移植瘤标本，将肿瘤组织10％甲醛固定，石蜡包埋，切片HE染色。(4.2)观察原位模型的肿瘤生长情况，人结肠癌组织原位移植后，定时观察裸小鼠的全身状况，运动情况，腹部体征。当荷瘤小鼠出现明显消瘦，弓背，精神萎靡等衰竭体征时将裸鼠处死，解剖原位移植模型，观察原位肿瘤生长情况，腹腔脏器转移情况及淋巴结转移情况。