[发明专利]中国水仙多糖的提取分离方法

摘要

本发明涉及的是一种从中国水仙球茎中提取分离水仙多糖的方法，该方法包括如下工艺步骤：一、水仙球茎预处理；三、水仙多糖的提取：四、粗多糖脱蛋白；五、沉淀法制备水仙粗多糖；六、水仙粗多糖的纯化。是以新鲜的中国水仙球茎为原料，采用水提醇沉法提取水仙多糖，以三氯乙酸法脱除粗多糖中的蛋白质，最后采用离子交换柱色谱和凝胶排阻色谱法进行纯化得到单一的多糖组分。本发明方法能够充分提取球茎中的多糖组分，所得多糖纯度高，能充分保持原有的生物活性；制备过程中，只以水和乙醇为溶剂，所用的凝胶材料经处理后可多次重复使用，降低了生产成本，适合大规模工业化生产。

主权项

中国水仙多糖的提取分离方法，其特征是该方法包括以下步骤：一、水仙球茎预处理：取新鲜的水仙球茎剥去表面干枯的表皮后清水洗净，切成10mm×10mm的小片，在40～50℃下烘箱干燥1h，去除表面的水分；二、水仙球茎脱脂：将预处理过的水仙球茎片加入该水仙球茎片3～3.5倍(ml/g)的95％乙醇，回流1～1.5h，再经过滤，滤渣经风干、粉碎后用于后续的多糖提取；三、水仙多糖的提取：脱脂后的球茎粉末用该球茎粉末10～15倍(ml/g)热水在80℃下浸提3～4次，每次浸提时间为6～8h，浸提液经高速离心机离心，得到上清液经旋转浓缩至1/4体积，得到水仙粗多糖水溶液；四、粗多糖脱蛋白：水仙粗多糖水溶液脱蛋白的方法有Sevage法或三氯乙酸法或等电点法；五、沉淀法制备水仙粗多糖：经过脱蛋白处理所得到的水仙多糖水溶液，加入3～4倍体积量的95％乙醇进行沉淀，经抽滤所得的滤饼依次用无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤，冷冻干燥去除所含的少量溶剂后得到水仙粗多糖；六、水仙粗多糖的纯化：将醇沉所得的水仙粗多糖溶于蒸馏水，并制成饱和溶液，经离心除去少量不溶物后，1)采用DEAE‑Sephadex A50型离子交换柱初步分离；2)采用梯度洗脱方式，分别采用蒸馏水、0.1mol/L NaCl水溶液、0.5mol/L NaCl水溶液、1.0mol/L NaCl水溶液洗涤，用苯酚‑硫酸法跟踪检测，收集单一峰组分；3)采用透析法去除NaCl离子后再浓缩；4)浓缩液用Sephadex G‑100进一步分离，用去离子水洗脱，收集单一峰，洗脱液经减压浓缩、冷冻干燥，得到单一多糖组分。