[发明专利]热稳定性提高的脂肪酶突变体

摘要

热稳定性提高的脂肪酶突变体，属于酶的基因工程技术领域。本发明公开了由华根霉(Rhizopus chinensis)CCTCC No.M201021脂肪酶作为亲本，经分子生物学技术而获得的热稳定性提高的脂肪酶突变体。在各突变体的氨基酸序列中，涉及到的氨基酸突变为Met101Thr、Glu107Gly、Ala129Ser、Ser151Asn、Cys160Leu、Lys161Arg、Pro168Leu、Pro168His、Leu180His、Asp182Tyr、Thr183Ala、Thr218Ser、Lys219Asp、Ala230Phe、Ser234Phe、Val261Gly、His317Pro、Val329Ala、Glu363Arg、Asn366Asp、Ser373Cys中的一种或几种。以在65℃下半衰期t50来表示，这些突变体的热稳定性较亲本华根霉脂肪酶得到了提高。本发明也公开了编码脂肪酶突变体的DNA序列、表达载体、宿主细胞。

主权项

热稳定性提高的脂肪酶突变体，其特征在于由亲本华根霉(Rhizopuschinensis)CCTCC M 201021脂肪酶进行定向进化，通过易错PCR、DNAShuffling和定点突变，获得脂肪酶突变体，亲本华根霉氨基酸序列SEQ ID NO：1中在氨基酸取代位置发生突变，采用“原始氨基酸‑位置‑替换的氨基酸”来表示脂肪酶突变体中突变的氨基酸，所述脂肪酶突变体为：，脂肪酶突变体氨基酸取代位置突变体1       Ser234Phe突变体2       Pro168Leu/Val329Ala突变体3       Cys160Leu突变体4       His317Pro/Met101Thr突变体5       Ser151Asn/Leu180His突变体6       Val261Gly/Ser373Cys突变体7       Asp182Tyr/Ala230Phe突变体8       Leu180His/Thr218Ser突变体9       Asn366Asp/Leu180His/Val329Ala突变体10      Ser234Phe/Leu180His/Thr218Ser突变体11      Ser234Phe/Pro168His/Val329Ala/Cys160Leu/His317Pro/Met101Thr突变体12      Leu180His/Thr218Ser/Val261Gly/Lys161Arg突变体13      Glu107Gly/Ala129Ser/Glu363Arg/Lys161Arg/Val261Gly/Leu180His突变体14      Lys161Arg/Leu180His/Thr218Ser/Met101Thr/Thr183Ala/              Glu107Gly/Ser151Asn/Glu363Arg突变体15      Glu107Gly/Ala129Ser/Ser151Asn/Lys161Arg/Leu180His/              Ser234Phe/Glu363Arg/Val329Ala突变体12‑1    Ala230Phe/Leu180His/Thr218Ser/Val261Gly/Lys161Arg突变体13‑1    Glu107Gly/Ala129Ser/Ser151Asn/Lys219Asp/Leu180His/              Glu363Arg/Ala230Phe华根霉脂肪酶氨基酸突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO：2，有22个突变氨基酸；用于表达所述的脂肪酶突变体的表达载体为：pPIC9K，pPIC3.5K，pPICZα，pPICZ；用于所述的表达载体转化的微生物宿主细胞为毕赤酵母。