[发明专利]一种固定化酶整体毛细管色谱柱及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种固定化酶整体毛细管色谱柱，按照以下方法制备得到：将四乙氧基硅烷与甘油，在强酸性离子交换树脂作用下，制得改性硅烷，改性硅烷中加水和磷酸溶液，混匀得到改性硅烷溶液；然后将含有酶和聚乙二醇的磷酸缓冲液与改性硅烷溶液以质量比1∶1混合，搅拌均匀后，用注射器注入预处理过的玻璃毛细管中，注满后静置5～10分钟，然后将玻璃毛细管浸入磷酸缓冲液中，于3～7℃下静置7～9天，制得固定化酶整体毛细管色谱柱。所述固定化酶整体毛细管色谱柱可应用于筛选与所述固定化酶整体毛细管色谱柱中固定的酶有亲和作用的化合物。本发明固定化酶整体毛细管色谱柱的制备方法简单，使用稳定性高，用于化合物筛选更准确。

主权项

一种固定化酶整体毛细管色谱柱，其特征在于所述的固定化酶整体毛细管色谱柱按照以下方法制备得到：(1)将四乙氧基硅烷与甘油以质量比1∶0.2～0.6混合后，再加入四乙氧基硅烷质量2～3％的强酸性离子交换树脂，在35～45℃下，搅拌混合72～120小时，然后过滤除去强酸性离子交换树脂，取滤液减压蒸馏除去甘油与生成的乙醇，得到改性硅烷，所述改性硅烷中加入改性硅烷质量1.2～1.6倍的水和改性硅烷质量1.5～2.5％的1mol/L的磷酸溶液，混匀得到改性硅烷溶液；(2)在浓度40mmol/L、pH值为7.0～7.5的磷酸缓冲液中加入平均分子量为400～1500的聚乙二醇和酶，配成含有酶和聚乙二醇的磷酸缓冲液，所述含有酶和聚乙二醇的磷酸缓冲液中聚乙二醇的浓度为70～90mg/mL，酶的浓度为90～100mg/mL，将含有酶和聚乙二醇的磷酸缓冲液与步骤(1)得到的改性硅烷溶液以质量比1∶1混合，搅拌均匀后得混合液，用注射器将所述的混合液注入预处理过的玻璃毛细管中，注满后静置5～10分钟，然后将玻璃毛细管浸入40mmol/L、pH值7.0的磷酸缓冲液中，于3～7℃下静置7～9天，制得所述固定化酶整体毛细管色谱柱，所述酶为胰蛋白酶、α葡萄糖苷酶或血管紧张素转化酶。