[发明专利]一种聚乙二醇修饰蛋白的分离纯化方法

摘要

本发明涉及一种聚乙二醇修饰蛋白的分离纯化方法。本发明发现一种新型阳离子层析介质MacroCap SP能够灵敏的感应蛋白质表面电荷的分布关系，蛋白质表面正电荷越多，则与MacroCap SP结合能力越强，被洗脱所需要的离子梯度也越高。利用该性质可有效分离聚乙二醇修饰蛋白分子，所述方法包括如下步骤(1)目标蛋白经过带有活性反应基团聚乙二醇修饰后，调节反应液的pH值低于聚乙二醇修饰蛋白的等电点；(2)将反应液上样于已平衡好的MacroCap SP阳离子交换柱；(3)在平衡缓冲液基础上加入钠盐溶液进行离子梯度洗脱，收集目标峰。本发明的方法适合聚乙二醇修饰的重组人粒细胞刺激因子和艾塞那肽的有效分离。

主权项

一种聚乙二醇修饰重组人粒细胞集落刺激因子蛋白的分离纯化方法，包括如下步骤：(1)、目标蛋白重组人粒细胞集落刺激因子经过带有活性反应基团的甲氧聚乙二醇醛修饰后，调节反应液的pH值至酸性，且pH值应低于聚乙二醇修饰蛋白的等电点；(2)、将反应液上样于已经缓冲液平衡好的MacroCap SP阳离子交换柱；(3)、在平衡缓冲液基础上加入钠盐溶液进行离子梯度洗脱，收集目标峰,所述的离子梯度洗脱条件为在平衡缓冲液的基础上，先以5％～15％的0.5‑1.5mol/L钠盐溶液洗脱多个PEG修饰的目标蛋白，再以20％～50％的0.5‑1.5mol/L钠盐溶液洗脱单修饰的目标峰；(4)、将收集的单修饰的目标峰再次进行MacroCap SP介质分离，实现目标峰的纯度在95％以上。