[发明专利]一种特异性半定量检测苯并芘的方法

摘要

本发明公开了一种特异性半定量检测苯并芘的方法，包括：抗原合成、抗原固定、苯并芘检测、检测信号的获得。其关键在于，加入辣根过氧化物酶的化学发光底物后在暗室中反应，使用感光胶片对信号显影曝光，再对检测信号进行分析。此外，还摸索出一套适合检测的条件。该方法比普通的检测苯并芘的方法要简便，快速，实用，无需使用任何仪器，节省了成本，结果准确。为环境中苯并芘的监测提供了一条新途径。

主权项

一种特异性半定量检测苯并芘的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)抗原合成使用2mL预冷的pH 1.5-2.0盐酸配制质量浓度为10.86g/L的1-氨基芘溶液；在上述溶液中缓慢滴加过量的预冷pH 2.0的亚硝酸钠溶液后，在0-5℃进行重氮化反应1小时；将反应完全的1-氨基芘重氮盐溶液逐滴加入到配制好的体积为5mL，pH值为7.5、浓度为0.1mol/L含有68mg牛血清白蛋白的磷酸缓冲液中；使用1mol/L氢氧化钠溶液将pH值调至7.5，4℃反应过夜；反应液使用0.9％生理盐水透析后制得抗原；(2)抗原固定将稀释浓度为1∶200的抗原溶液点加到硝酸纤维素膜上，室温条件下放置1小时；使用含有5％的脱脂牛奶的磷酸缓冲液将膜封闭1小时；(3)苯并芘检测使用磷酸缓冲液配置不同浓度的苯并芘溶液；将点加有抗原的硝酸纤维素膜、稀释浓度为1∶2500抗多环芳烃抗体和磷酸缓冲液配置的不同浓度苯并芘溶液混合，室温条件下反应1小时；(4)检测信号的获得使用磷酸缓冲液将反应后的硝酸纤维素膜漂洗三次，每次10分钟；使用含有5％的牛血清白蛋白磷酸缓冲液稀释辣根过氧化物酶标记的二抗，稀释浓度为1∶1000；将漂洗后的硝酸纤维素膜和二抗混合，室温条件下反应30分钟；使用磷酸缓冲液再次将反应后的硝酸纤维素膜漂洗三次，每次10分钟；加入辣根过氧化物酶的化学发光底物4mL，在暗室中反应5-10分钟后，使用感光胶片对信号进行收集曝光，再将曝光后的感光胶片分别放入20mL显影和定影液进行显影、定影，显影时间为10分钟，定影时间为5分钟。(5)检测信号的分析，获得与检测信号相对应的苯并芘浓度。