[发明专利]一种从棕色脂肪分离心脏干细胞及其成心肌分化的方法

摘要

本发明公开了一种属于从棕色脂肪分离心脏干细胞及其成心肌分化的方法。该方法包括：(1)消化液的制备：将胶原酶、dispaseII 与胰酶以质量比1∶1∶0.5-1的比例溶于无血清的培养基中；(2)使用加有玻璃珠和转子的消化瓶消化棕色脂肪组织，然后离心收集细胞；(3)原代心脏干细胞的培养与成心肌细胞分化。本发明采用组合的消化酶液及其特殊的消化方法进行细胞分离，与现有的分离方法相比，该分离方法显著的提高了细胞的产率，同时心脏干细胞的含量也明显提高，可通过CD133的表达率与成心肌的能力得以验证，因此心脏干细胞的产率也显著提高。本方法获得的心脏干细胞产率高、操作简单、可实施性强，减少了人为操作。

主权项

一种从棕色脂肪分离心脏干细胞及其成心肌分化的方法，其特征在于，按照如下操作步骤进行：(1)消化液的制备将胶原酶、dispaseII与胰酶以质量比1∶1∶0.5-1的比例溶于无血清的培养基中，其中，胶原酶、dispaseII和胰酶在无血清的培养其中的浓度均为0.5-2mg/mL，完全溶解后，调解pH至7.2-7.4，获得消化液；(2)来源于棕色脂肪的原代心脏干细胞的分离将清洗并剪碎的棕色脂肪组织加入到含有上述消化液的消化瓶中，每10毫升消化液加入0.5-1.0克棕色脂肪组织，加盖后放在磁力搅拌器上进行搅动，转速为80-120rpm，在37℃，5％CO2的孵箱中消化45-60min，然后以血清终止消化反应，其中，血清与消化液的体积比为1-2∶10，将消化液过滤后离心收集细胞，即获得原代心脏干细胞；其中，所述消化瓶中装有玻璃珠和磁力搅拌转子；(3)原代心脏干细胞的培养与成心肌细胞分化使用含血清的α-MEM培养基重悬上述原代心脏干细胞，其中，血清的体积百分比浓度为10％，然后以5×103-5×104/cm2的密度将原代心脏干细胞接种于组织培养基中进行培养分化，隔天换组织培养基，培养2-4周，心脏干细胞可分化为节律搏动的心肌细胞。