[发明专利]一种简单高效价廉的森林土壤样品DNA纯化方法

摘要

本发明提供一种从森林土壤中纯化微生物DNA的方法，步骤包括：(1)采用常规方法获得微生物的粗品DNA；(2)用提取缓冲液溶解粗品DNA，通过水浴、等体积氯仿-戊异醇溶液抽提后，将上清液加入0.6倍体积的异丙醇，析出DNA沉淀，并用预冷的70％乙醇洗涤，而后溶于TE缓冲液溶中；(3)将初步纯化的DNA用硅胶柱进一步纯化。该方法能够去除提取的土壤微生物DNA粗品中的绝大部分杂质，得到高纯度的DNA，可以直接用于对抑制物非常敏感的常规PCR；本发明操作简单，成本低，耗时少；适用范围广，可以用于其它已有土壤直接提取方法之后，纯化各种类型的土壤DNA。

主权项

1、一种从森林土壤中纯化微生物DNA的方法，步骤包括：(1)采用常规方法处理土壤的微生物，获得微生物的粗品DNA；(2)用提取缓冲液溶解粗品DNA，使用移液器抽打几次后置于65℃水浴10分钟，再加入等体积氯仿-戊异醇溶液抽提，离心分层。上清液在室温下加入0.6倍体积的异丙醇，静置几分钟后离心，将DNA从液相中沉淀析出，弃上清液，沉淀用预冷的70％乙醇洗涤，用TE缓冲液溶解DNA沉淀；(3)将初步纯化的DNA用硅胶柱进一步纯化。经初步纯化获得的DNA中加入3倍体积纯化缓冲液(一般胶回收试剂盒中的融胶液即可，优先选用QIAquick Gel ExtractionKit的融胶液)混合，几分钟后，过柱，使用洗液洗涤两次后，用TE缓冲液洗脱即获得纯的DNA；其中，所述的提取缓冲液包含100mM Tris-HCl、100mM sodium EDTA[pH 8.0]、100mM磷酸钠[pH 8.0]、1.5M NaCl、1％CTAB；所述的纯化缓冲液主要成份是10％异硫氰酸胍。