[发明专利]改进的从溶组织梭菌液体培养物纯化胶原酶有效
| 申请号： | 200910145311.6 | 申请日： | 2009-06-01 |
| 公开（公告）号： | CN101684461A | 公开（公告）日： | 2010-03-31 |
| 发明（设计）人： | H·埃克斯坦;M·费希尔;W·霍尔克;A·利雷;B·苏普曼;J·-P·萨尔霍弗 | 申请（专利权）人： | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/52 | 分类号： | C12N9/52;C12R1/145 |
| 代理公司： | 中国专利代理(香港)有限公司 | 代理人： | 权陆军;黄可峻 |
| 地址： | 瑞士*** | 国省代码： | 瑞士;CH |
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| 摘要： | 本发明提供通过依次进行硫酸铵沉淀、疏水性相互作用层析、阳离子交换层析和阴离子层析，从复杂混合物中纯化溶组织梭菌(Clostridiumhistolyticum)I型和II型胶原酶蛋白的方法。并且提供即使在沉淀步骤后也使部分纯化的制剂稳定的条件。本发明的方法能够快速和有效的去除其他蛋白水解活性。本发明的制剂提供特别纯的和完整的具有酶活性的I型和II型胶原酶蛋白。本发明还提供所述两种分离的蛋白的混合物。本发明还提供所述纯化的胶原酶蛋白或其混合物用于体外处理组织样品的用途。 | ||
| 搜索关键词： | 改进 组织 液体 培养 纯化 胶原酶 | ||
【主权项】：
1.一种从复杂混合物纯化溶组织梭菌I型和II型胶原酶蛋白的方法，包括以下步骤：(a)提供溶于水性液相的复杂混合物；(b)通过在步骤(a)的液相中溶解硫酸铵形成I型和II型胶原酶蛋白的沉淀；(c)从所述液相分离步骤(b)的沉淀；(d)在包含Ca2+离子并且pH为6.0到8.0的水性缓冲液中溶解步骤(c)的沉淀，调节含有溶解的沉淀的缓冲液的电导率值为50到300mS/cm，从而形成包含I型和II型胶原酶蛋白的复杂缓冲溶液；(e)通过将步骤(d)的复杂缓冲溶液与疏水性固定相接触并使I型和II型胶原酶蛋白吸附到所述固定相上，以此来提取所述步骤(d)的复杂缓冲溶液；(f)将步骤(e)的含有吸附的I型和II型胶原酶蛋白的疏水性固定相与提取的溶液分离；(g)从步骤(f)的固定相洗脱I型和II型胶原酶蛋白；从而纯化I型和II型胶原酶蛋白。
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