[发明专利]诱导分泌表达生产重组葎草主要致敏蛋白Hum j 3的方法有效
| 申请号： | 200910091766.4 | 申请日： | 2009-08-25 |
| 公开（公告）号： | CN101993888A | 公开（公告）日： | 2011-03-30 |
| 发明（设计）人： | 尹佳;周俊雄;程璇 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院北京协和医院 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12P21/02;C12N1/19;G01N33/68;A61K39/00;A61P37/08;C12R1/84 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王朋飞 |
| 地址： | 100730 北京*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供一种在酵母系统中诱导表达重组葎草花粉主要致敏蛋白Hum j 3的方法，包括：构建表达SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的重组表达载体；线性化重组表达载体，转化感受态酵母细胞；筛选阳性克隆，得重组菌株，并扩大培养；重组菌株的诱导表达以及筛选：Hum j 3蛋白在酵母中以α-factor信号肽蛋白引导的分泌表达；以高活性的重组菌株为种子菌进行高密度的诱导表达重组Humj 3蛋白；收集培养上清并分离纯化Humj 3。本发明首次在国际上确证了葎草主要致敏蛋白的全基因序列，并首次成功进行了酵母分泌表达，且证实了该重组蛋白具有免疫活性，为葎草花粉过敏患者的分子诊断和临床免疫治疗提供了全新的蛋白。 | ||
| 搜索关键词： | 诱导 分泌 表达 生产 重组 主要 蛋白 hum 方法 | ||
【主权项】：
一种诱导分泌表达生产重组葎草主要致敏蛋白Hum j 3的方法，其特征在于它包括如下步骤：(1)构建表达SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的重组表达载体；(2)线性化重组表达载体，转化感受态酵母细胞；(3)筛选阳性克隆，得重组菌株，并扩大培养；(4)重组菌株的诱导表达以及筛选：Humj 3蛋白在酵母中以α‑factor信号肽蛋白引导的分泌表达，筛选活性较高的重组菌；(5)以活性较高的重组菌株为种子菌进行高密度的诱导表达重组Hum j 3蛋白；(6)收集培养上清并分离纯化Hum j 3。
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