[发明专利]一种基于超声波及荧光观察的总菌数测定方法

摘要

本发明公开了一种基于超声波及荧光观察的总菌数测定方法，属于食品微生物检测领域。该方法用一定尺寸的圆形橡胶圈与设备表面组合成密封容器，以超声波空化效应对设备表面的生物被膜进行取样，荧光染色后过滤，显微镜下拍照计数。此法用于对食品生产车间内加工设备表面总菌数的测定，误差小，耗时短，为及时有效的杀菌消毒提供依据。

主权项

1、一种基于超声波及荧光观察的总菌数测定方法，其特征在于：将内径为1.60-1.96cm的橡胶圈下沿直接与平坦的设备表面接触，橡胶圈上再放置一个与其内径相同的圆柱形硬塑料管，人工向下压塑料管，使橡胶圈、设备表面和硬塑料管形成一个密闭的可以盛装液体的容器，向容器内部注入含0.5-1.5％吐温-80的无菌PBS缓冲液5-10mL，缓冲液pH是7.35至7.40，将超声波细胞破碎仪的变幅杆插入液面以下0.5-1.3cm，其中，处理功率80-120W，处理时间10-20s，温度为室温，将菌悬液充分吸出，置于离心管中，滴入染色剂500-1000μL，染色3-5min后，收集于灭菌注射器中，过滤，将菌体富集于黑色的聚碳酸酯膜上，用无菌PBS缓冲液清洗2-3次，缓冲液pH是7.4，室温晾干后，于荧光显微镜观察，在显微镜下随机取20-50个视野，拍照，分别计算照片中的菌数并求平均值，经换算得到生产设备表面单位面积的总菌数。