[发明专利]象鼻兰的种苗试管繁殖方法

摘要

本发明提供一种象鼻兰的种苗试管繁殖方法，本方法选取生长健壮的象鼻兰母株，于开花时进行人工授粉，将授粉后发育至基本成熟而未开裂时的果实做为外植体，并经过无菌播种或原球茎的增殖并分化培养、壮苗培养和试管苗移栽等繁殖步骤。分别采用专门配制的培养基进行无菌播种和原球茎的继代增殖，获得小植株，再将小植株经在专门配制的壮苗培养基上培养后移栽。本发明具有种子的萌发率高、成苗快、种苗品质好、成本低廉等特点，能在短期内获得大量的试管苗，成苗的移栽成活率90％以上。能为象鼻兰的种苗生产提供一条有效的途径。

主权项

1、象鼻兰的种苗试管繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：(1)材料：选取生长健壮的象鼻兰母株，于开花时进行人工授粉，将授粉后发育至基本成熟而未开裂时的果实做为外植体用于播种；(2)无菌播种或原球茎的增殖并分化培养：a、无菌播种：将所述外植体用70％-80％的酒精浸泡30-60秒后置于0.1％-0.2％的升汞溶液中消毒10-20分钟，再用无菌水漂洗4～5次后切开果实，将其粉末状胚接种培养到种子萌发培养基上，所述的种子萌发培养基为改良的Knudson C培养基附加体积百分比5％-10％的椰子汁，其中改良的Knudson C培养基每升含硫酸铵400-600mg，磷酸二氢钾200-300mg，硫酸镁200-300mg，硝酸钙500-1500mg，硫酸锰5-10mg，硫酸亚铁20-40mg，蔗糖15～30g，琼脂6～7g，活性炭0.5～2g，肌醇80-120毫克/升，甘氨酸1.5-2.5毫克/升，盐酸硫胺素(VB1)0.05-0.2毫克/升，盐酸吡哆醇(VB6)0.4-0.8毫克/升，烟酸0.4-0.8毫克/升，pH 5.4-5.6；b、原球茎的增殖并分化培养：将原球茎培养在所述的改良Knudson C培养基附加体积百分比5％-10％的椰子汁再附加TDZ 0.01-0.2毫克/升的培养基上，在原球茎上获得大量的类原球茎或/和愈伤组织，再将这些类原球茎或/和愈伤组织培养在改良的Knudson C培养基附加体积百分比5％-10％的椰子汁再附加活性炭0.5～2g/L的培养基上，所述的改良的Knudson C培养基的组分如步骤(2)a中所述；(3)壮苗培养：将在上述无菌播种培养所得的小植株或通过原球茎增殖并分化而得的小苗接种培养到壮苗培养基上，所述的壮苗培养基每升含花宝1号1～3g，蛋白胨0.5～3g，萘乙酸0.5-3mg、香蕉匀浆50-100g、活性炭0.5～2g，蔗糖15～30g，琼脂6～7g，肌醇80-120毫克/升，甘氨酸1.5-2.5毫克/升，盐酸硫胺素(VB1)0.05-0.2毫克/升，盐酸吡哆醇(VB6)0.4-0.8毫克/升，烟酸0.4-0.8毫克/升，pH 5.4-5.6；(4)试管苗移栽：当植株约3-5厘米高时，将培养瓶转移到自然光下炼苗10-15天，然后将其从培养瓶中取出，洗净根部的培养基，移入兰石∶蕨根∶泥炭为1∶0.5～2∶0.5～2的混合基质中；上述步骤(2)～(3)中培养条件为培养温度24-28℃，光照度1500～2000l x，光照12-16小时/天。