[发明专利]一种基于抗原-抗体反应的可控的金纳米棒组装的方法

摘要

一种基于抗原-抗体反应的可控的金纳米棒组装的方法，属于纳米免疫技术领域。本发明通过不同方法将抗原抗体定向的偶联到金纳米棒的端面或侧面，在通过抗原抗体间的识别反方实现金纳米棒的组装。组装过程在液体环境中反应，操作方法简单，条件温和并快速的实现金纳米棒的可控组装，在一定时间内就能生成大规模的组装产物。

主权项

一种基于抗原-抗体反应的可控的金纳米棒组装的方法，其特征是包括金纳米棒侧面组装或金纳米棒端面组装；(1)金纳米棒侧面组装：a.抗体修饰金纳米棒：100μg/mL的庆大霉素抗体0.5mL逐滴加入用0.1mol/L的碳酸钾预调至pH 8.5-8.8、0.5mL、2n mol/L金纳米棒溶液中，室温震荡混匀，37℃反应1h，反应结束6000rpm离心20min，去除未结合的抗体，重悬在pH 7.4、含0.5％聚乙二醇PEG20000的0.01mol/L PBS中，制得庆大霉素抗体修饰的金纳米棒探针；b.包被原修饰金纳米棒：100μg/mL的庆大霉素包被原0.5mL逐滴加入用0.1mol/L的盐酸预调至pH 5、0.5mL、2n mol/L金纳米棒溶液中，室温震荡混匀，37℃反应1h，反应结束6000rpm离心20min，去除未结合的包被原，重悬在pH 7.4、含0.5％PEG20000的0.01mol/L PBS中，制得庆大霉素包被原修饰的金纳米棒探针；c.在抗原-抗体作用下的金纳米棒侧面靠侧面组装：10μL修饰庆大霉素包被原的金纳米棒溶液中加入10μL修饰庆大霉素抗体的金纳米棒溶液，漩涡混匀，37℃孵育0.5h后反应结束，取10μL反应液稀释5倍后透射电镜表征产物；或(2)金纳米棒端面组装：a.抗体的修饰：抗体的修饰采用碳二亚胺法进行硫辛酸和庆大霉素抗体的结合，操作步骤如下：①含1.625mg硫辛酸的乙醇溶液0.3mL与0.4mL的庆大霉素抗体混合；②将75μL的碳二亚胺在磁力搅拌的条件下逐滴滴入上述步骤①溶液中后室温反应4h；③用pH 7.4的磷酸盐缓冲液透析3天，每天换3次透析液；④将硫辛酸修饰的庆大霉素抗体放在4℃备用；b.抗体修饰金纳米棒端面采用晶种生长法合成金纳米棒首先要经过7500rpm离心15min去除溶液中多余的Vc、AgNO3和小的球形粒子金纳米棒后，利用pH 3.8、含有0.1％PEG20000的0.005mol/L十六烷基三甲基溴化铵CTAB溶液进行重悬，重悬液用1mol/L HCl调整至pH 3.8，0.5mL、2n mol/L重悬后的金纳米棒溶液GNRs逐滴滴加到由50μL稀释到1mL的硫辛酸修饰的庆大霉素抗体稀释液中，室温搅拌反应4h，反应结束后6000rpm离心10min，运用pH 3.8、含有0.1％PEG20000的0.005mol/L CTAB溶液1mL中进行重分散，用该溶液洗涤两遍，最后用pH3.8、含有0.1％PEG20000的0.005mol/L CTAB溶液50μL进行重分散，此偶联物置于4℃保存；c.包被原的修饰：包被原的修饰采用碳二亚胺法进行硫辛酸和包被原的结合，步骤如下：①含1.625mg的硫辛酸的乙醇溶液0.3mL与0.2mL的庆大霉素包被原溶液混合；②将75μL的碳二亚胺在磁力搅拌的条件下逐滴滴入上述步骤①溶液中后室温反应4h；③用pH 7.4的磷酸盐缓冲液透析3天，每天换液3次；④将硫辛酸修饰后的庆大霉素包被原放在4℃备用；d.包被原修饰金纳米棒端面：硫辛酸修饰的庆大霉素包被原60μL用940μL的pH 3.80、含有0.1％PEG20000的005mol/L CTAB溶液进行稀释；将pH 3.8、0.5mL、2n mol/L重悬后的金纳米棒溶液GNRs逐滴滴加到硫辛酸修饰的庆大霉素包被原的稀释液中，室温搅拌反应4h，反应结束后6000rpm离心10min，运用pH 3.8、含有0.1％PEG20000的0.005mol/L CTAB溶液1mL中进行重分散，用该溶液洗涤两遍，最后用pH 3.8、含有0.1％PEG20000的0.005mol/L CTAB溶液50μL进行重分散，此偶联物置于4℃保存；e.在抗原-抗体作用下的金纳米棒端面对端面的组装：10μL硫辛酸修饰后的庆大霉素包被原的金纳米棒溶液中加入10μL硫辛酸修饰庆大霉素抗体的金纳米棒溶液，漩涡混匀，37℃孵育0.5h后反应结束，取10μL反应液稀释5倍后透射电镜表征产物。