[发明专利]一种蓝藻藻蓝蛋白的富集分离方法

摘要

一种蓝藻藻蓝蛋白的富集分离方法，属于生化分离工程技术领域。本发明步骤为：蓝藻破壁液的制备；JDN-3型树脂富集蓝藻破壁液中的藻蓝蛋白；洗脱分离藻蓝蛋白；JDN-3型树脂层析分离；洗脱液在脱盐后进行冷冻干燥，获得一定纯度的藻蓝蛋白；蛋白回收率最高可达85.5％。该方法简单，对蓝藻破壁液直接使用JDN-3型树脂进行富集，不采用通常的硫酸铵盐析、有机溶剂、等电点等方法，降低了制备过程中化学试剂使用量，简化了纯化过程的步骤，避免了产品损失，使用JDN-3型树脂层析后所得的藻蓝蛋白具有较高纯度，纯度达到A₆₂₀/A₂₈₀＞2.2。原料采用鲜藻或干藻粉，甚至是野外的太湖水华蓝藻，从而提供了一种解决藻类资源规模化利用的技术方法。

主权项

1、一种蓝藻藻蓝蛋白的富集分离方法，其特征在于步骤为：蓝藻破壁液的制备；JDN-3型树脂富集蓝藻破壁液中的藻蓝蛋白；洗脱分离藻蓝蛋白；JDN-3型树脂层析分离；洗脱液在脱盐后进行冷冻干燥，获得一定纯度的藻蓝蛋白；(1)蓝藻破壁液的制备：采用水作提取剂，藻粉或鲜藻与水的固液质量比为1∶1～1∶10，搅拌均匀后，置于-10℃～-20℃下冷冻一定时间后，37℃融解，如此反复冻融4-6次；融化后的蓝藻破壁液4800-18000r/min离心10-30min，取上层清液；(2)JDN-3型树脂富集蓝藻破壁液中的藻蓝蛋白：在容器中加入蓝藻破壁液和JDN-3型树脂，蓝藻破壁液中蛋白质浓度为10～35mg/mL，JDN-3型树脂在蓝藻破壁液中的重量体积百分浓度为5％～20％，密闭后，25～35℃下，在振荡器上振荡4～10小时，振荡器转速为100r/min，振荡结束后，经过抽滤，获得饱和吸附藻蓝蛋白的JDN-3型树脂；(3)洗脱分离藻蓝蛋白：将步骤2中获得的饱和吸附藻蓝蛋白的JDN-3型树脂，用含0.1～0.5mol/L氯化钠的0.005～0.5mol/L的磷酸缓冲液多次洗涤，收集含藻蓝蛋白的洗脱液，透析脱盐后，真空浓缩获得浓缩液；(4)JDN-3型树脂层析分离：采用湿法，将JDN-3型树脂加到层析柱内，使之自然沉降，直至达到所需的高度为止，将多余的液体放出，使液面刚好与柱床表面一致，步骤3中获得的浓缩液的加入量为床层体积的1/10；待浓缩液中的蛋白被完全吸附后，用含0.1～0.5mol/L氯化钠的0.005～0.5mol/L的磷酸缓冲液梯度洗脱，控制流速在0.5～2mL/min，收集富含藻蓝蛋白的洗脱液段；(5)透析脱盐、冷冻干燥：将收集的藻蓝蛋白洗脱液透析脱盐，最后冷冻干燥，得到纯度A620/A280＞2.2的高纯度藻蓝蛋白粉末。