[发明专利]银屑病基础研究模型的建立方法及气液平面跨膜装置

摘要

银屑病基础研究模型的建立方法及气液平面跨膜装置，利用银屑病链球菌诱导机制及T细胞介导过度增殖的机制，创新性的采用加入银屑病外周血T淋巴细胞及溶血性链球菌抗原的无血清培养基，体外培养银屑病皮损。可维持银屑病皮损特征性组织形态长达一周之久。用于银屑病体外皮损培养的气液平面跨膜装置，包括银屑病基础研究模型的建立方法中所述的含银屑病外周血T细胞和溶血性链球菌抗原的无血清培养基、灭菌擦镜纸制造气液平面，在灭菌擦镜纸上承载组织块以及37℃，CO₂饱和度为5％气相。该装置不仅可完全模拟人体皮肤生长的气液交界环境，还可达到体外皮肤组织培养的要求，且该装置制备简单易行，节省开支，具备可重复性，可控制性等优点。

主权项

1、一种银屑病基础研究模型的建立方法，其特征在于是按照下述步骤建立：(1)取材：①皮肤标本：半年内未经治疗寻常性银屑病皮损；②银屑病外周血：相应银屑病患者外周血2mL；③β-溶血性链球菌；(2)材料处理及运输将大小约1.5cm×1.5cm的未经治疗寻常性银屑病皮损，除去皮脂及部分真皮，放入含体积比含量占总体积10％的青霉素+链霉素的试剂200ul的William’s培养基的1.5mL离心管，4℃、30min内运至实验室；血样37℃、30min内运至实验室；(3)T淋巴细胞分离将相应的银屑病患者外周血2mL，与PBS 1∶1体积比混匀，小心加于4mL淋巴细胞分离液上，1500转/分离心20min，取上数第二层环状乳白色淋巴细胞层，PBS洗涤两次，24孔板培养，利用粘附贴壁分离法，去除单核细胞和部分B淋巴细胞，收集悬浮细胞，密度106个/mL于William’s培养基培养；(4)β-溶血性链球菌抗原制备将β-溶血性链球菌于哥伦比亚血平板中37℃培养24小时，平板菌落计数法计数，密度109个/m，培养液12000转/分离心，菌体沉淀收集后置双蒸水中，冰浴，40W×8分三次超声打散沉淀液细菌，25000转/分离心收集散菌菌体沉淀，称重，-20℃保存备用；(5)简易皮肤组织气液培养模型制备无菌六孔板，每孔滴入2mL William’s培养基，内含银屑病外周血T细胞密度约105个/ml及β-溶血性链球菌抗原密度约106个/ml。放置经灭菌处理的直径为2cm圆形擦镜纸浮于其上；(6)皮块处理在超净台内将皮损均匀切成3mm×3mm皮块，用含10％双抗的PBS洗涤3次，每次2min，轻放于准备好的培养装置的承载面上，表皮暴露于空气中，真皮处于液相中，加入步骤(3)中所制备的银屑病外周血T淋巴细胞，使其在2mL William’s培养基中密度达105个/ml；步骤(4)中所制备的β-溶血性链球菌抗原，使其在培养液中密度达106个/ml，于37℃，CO2饱和度为5％孵育箱中培养，48～72小时换液。