[发明专利]零背景构建重组杆状病毒的方法无效
| 申请号： | 200810140644.5 | 申请日： | 2008-07-16 |
| 公开（公告）号： | CN101372685A | 公开（公告）日： | 2009-02-25 |
| 发明（设计）人： | 张二辉;姚伦广;孙京臣;刘宗才;张红玲 | 申请（专利权）人： | 南阳师范学院 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N15/866 |
| 代理公司： | 郑州红元帅专利代理事务所（普通合伙） | 代理人： | 徐皂兰 |
| 地址： | 473061河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明是一种零背景构建重组杆状病毒的方法。具体步骤为：(1)构建以R6Kγ作为复制子的供体质粒，并按常规方法引入外源基因；(2)封闭DH10Bac宿主菌基因组上的attTn7受体位点，获得DH10BacΔTn7；(3)常规方法转化重组供体质粒进入DH10BacΔTn7获得重组杆状病毒；(4)常规方法制备重组Bacmid DNA转染昆虫细胞。本发明利用以R6Kγ为复制子构建条件限制型供体质粒，同时封闭DH10Bac宿主菌基因组上的attTn7重组位点，只需常规转化即可获得重组杆状病毒，并且由于其超过99％的阳性重组率，无须复杂的PCR验证和繁琐的空斑纯化，做到零背景真正高效快速的构建重组杆状病毒，促进杆状病毒表达系统的广泛利用。 | ||
| 搜索关键词： | 背景 构建 重组 杆状病毒 方法 | ||
【主权项】：
1.一种零背景构建重组杆状病毒的方法，其特征在于：该构建方法按下列步骤进行：(1)构建以R6Kγ作为复制子的供体质粒，并按常规方法引入外源基因；(2)封闭DH10Bac宿主菌基因组上的attTn7受体位点，获得DH10Bac△Tn7；(3)常规方法转化重组供体质粒进入DH10Bac△Tn7获得重组杆状病毒；(4)常规方法制备重组Bacmid DNA转染昆虫细胞。
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