[发明专利]一种抗条纹叶枯病水稻的育种方法

摘要

本发明涉及一种抗条纹叶枯病水稻的育种方法，属水稻遗传改良与生物技术应用领域。它是一种通过遗传改良途径，用杂交和分子标记辅助选择方法将一个亲本的条纹叶枯病抗性基因Stvb－i转育到另一个优质高产亲本中去，获得抗病优质高产新品种的育种技术。这种技术的优点是，可以快速鉴定出带抗性基因Stvb－i的单株，大大提高选择效率，缩短育种年限。这种水稻新品种不仅对条纹叶枯病表现稳定抗性，可比感病品种少用1～2次农药，降低生产成本，减少环境污染；而且聚合了杂交亲本双方的抗条纹叶枯病、优质、高产等特性，在江苏、上海、浙江等近年来条纹叶枯病猖獗发生的地区具有广阔的应用前景。

主权项

1.一种抗条纹叶枯病水稻的育种方法，其特征在于：1)选用条纹叶枯病抗性基因型为stvb-istvb-i的江苏高产粳稻品种武粳13为母本(♀)与条纹叶枯病抗性基因型为Stvb-iStvb-i的优质粳稻品种关东194为父本杂交配组；2)种植F₁、F₂、F₃，成熟后全部单株混收；3)F₄开始选择株高95～105em、每株8～10穗、每穗140～160粒的单株；4)种植F₅～F₇各世代株系，以感条纹叶枯病品种武育粳3号为对照；5)田间抗性筛选：利用条纹叶枯病大发生的自然条件，即感病对照武运粳3号最高自然发病株率达50％以上的条件对株系进行抗性筛选，发病单株病级参照Washio等1968年制定的抗性鉴定标准计算小区中感病植株的比例为发病率，将发病率分成5个等级：发病率＜4.9％分为一级、发病率5％～9.9％分为二级、发病率10％～19.9％分为三级、发病率20％～39.9％分为四级和发病率≥40％分为五级；选择抗性级别达到一级或二级、农艺性状稳定的小区；6)分子标记辅助选择：在农艺性状稳定的小区移栽后30天采取单株叶片2～3片，用SDS法提取DNA，用引物RM11-8序列进行PCR扩增：正向序列为TAGCCATGCTCATGCGTCAT，反向序列为CGCGGTTTGCAGTAGTTGC；扩增体系10μl，DNA模板1μl，94℃预变性5min，94℃变性0.5min，59℃复性0.5min，72℃延伸1min，35个循环后，72℃再延伸7min，反应产物在3.5％琼脂糖凝胶上电泳，经溴化乙锭染色并于凝胶成像系统下观察，获得157bp单一条带的确定为抗性基因型Stvb-iStvb-i的抗病株系；7)结合条纹叶枯病自然发病田间抗性筛选结果，F₄开始只在基因型为Stvb-iStvb-i、抗性级别达到一、二级的小区选择株高95～105cm、每株8～10穗、每穗140～160粒的单株，获得新品系“宁5055”，其株高98～102cm，每株8～10穗，穗长16 cm，穗型偏直立，每穗总粒数140～150粒，结实率90％～92％，千粒重26～27g。