[发明专利]一种在离体培养下诱导伊犁贝母多倍体的方法

摘要

本发明涉及一种在离体培养下诱导伊犁贝母多倍体的方法，该方法利用新鲜鳞茎诱导产生不定芽，通过含有不同浓度秋水仙素的MS液体培养基进行诱导处理，诱导产生多倍体伊犁贝母植株，通过改变染色体倍性使植株产生优良性状以提高其鳞茎产量及药用成分的含量，通过多倍体的筛选鉴定得到多倍体伊犁贝母，克服伊犁贝母在长期种植中出现品种退化问题。此方法可快速获得多倍体伊犁贝母，有效提高活性成分的含量，缩短种植周期。

主权项

1.一种在离体培养下诱导伊犁贝母多倍体的方法，其特征在于按下列步骤进行：a、将伊犁贝母新鲜鳞茎用自来水冲洗净表面，大鳞茎于太阳下晾晒12-24h，小鳞茎晾晒8-12h，然后将鳞茎在超净工作台上采用75％酒精时间30s或0.1-1％高锰酸钾水溶液处理1h或84消毒液浸泡20min进行表面消毒，然后用0.1％升汞6-10min或3-5％次氯酸钠水溶液处理5-10min，再用15％双氧水处理30-60min，无菌水冲洗2-3次；b、将步骤a中处理后的鳞茎切成0.1-0.2cm3大小接入不定芽诱导与增殖固体培养基MS+KT 0.5-1.0mg/L+NAA 0.1-0.4mg/L，温度20±1℃，光照2000lx，时间18h/d进行培养；c、将步骤b中伊犁贝母不定芽切成单芽，浸泡在含有秋水仙素50-1000mg/L，2％二甲基亚砜的液体MS培养基中，浸泡12-48h进行多倍体的诱导；d、将步骤b中伊犁贝母不定芽切成单芽，浸泡在不加秋水仙素的MS液体培养基，置于转速为100r/min摇床上浸泡，浸泡12-48h；e、将步骤c和d单芽分别用无菌水冲洗2-3次后，于无菌的滤纸上15-25min晾干后转入步骤b不含秋水仙素和二甲基亚砜的不定芽诱导与增殖固体培养基MS+KT 0.5-1.0mg/L+NAA 0.1-0.4mg/L中培养；f、伊犁贝母多倍体筛选：多倍体伊犁贝母的筛选根据二倍体与秋水仙素处理后不定芽在叶片宽度、叶面积、气孔保卫细胞大小及密度确定疑似株，将疑似株转入1/2 MS+NAA0.5-1.0mg/L生根培养基中生根；g、伊犁贝母多倍体鉴定：取疑似株幼嫩根尖和幼嫩不定芽组织，在4℃下，经过8-羟基喹啉预处理4-6h或饱和对二氯苯水溶液预处理5-10h或20％风油精预处理3-7h或0.1％秋水仙素预处理6-8h，卡诺固定液固定12-18h，1-2mol/L盐酸60℃解离8-10min，改良苯酚品红染色液染色5-10min，压片观察统计根尖、幼嫩不定芽染色体，确定多倍体植株。