[发明专利]一种抗菌肽改性丝蛋白膜材料的制备方法

摘要

本发明公开了一种丝蛋白膜材料的制备方法，旨在提供一种通过共价修饰制得新型的抗菌性丝蛋白膜材料的制备方法。包括Na₂CO₃溶液精练丝蛋白原料除杂、溴化锂水溶液溶解、干燥、酒精与水的混合液浸泡、磷酸缓冲液浸泡、EDCHCl/NHS溶液浸泡、磷酸缓冲液浸泡冲洗、干燥的步骤。本发明通过调节丝蛋白的浓度、抗菌肽溶液的浓度和共价修饰的条件，可以达到有效控制材料抗菌性能的目的。该膜材料既具有天然动物丝蛋白的结构和功能，又具有表面抗菌活性，并且抗菌性持久、温和，不会产生耐药性。从而解决了天然动物丝蛋白材料在临床实际运用中可能出现的细菌感染问题。

主权项

1、一种抗菌肽改性丝蛋白膜材料的制备方法，包括下列步骤：(1)用浓度为1～8g/L的Na2CO3溶液精练丝蛋白原料3次，除去丝蛋白表面的可溶性蛋白丝胶和杂质，每次30分钟，精练温度98℃，浴比1∶100；(2)经清洗干燥后，在30～70℃条件下，将丝蛋白溶解在8～10mol/L溴化锂水溶液中，所得溶液在蒸馏水中透析3天以除去溴化锂，制得丝蛋白的水溶液，溶液的浓度(w/v)为0.1～20％；(3)将丝蛋白溶液平铺于聚苯乙烯培养皿中，在37℃条件下自然干燥得丝蛋白膜；(4)将丝蛋白膜在酒精与水的混合液中浸泡10～40分钟，使丝蛋白膜难溶于水，其中，酒精的体积百分比(v/v)为50～100％；(5)将浸泡并干燥后的丝蛋白膜在磷酸缓冲液中浸泡15～45分钟，缓冲液pH值6.5，缓冲液组分及浓度：Na2HPO4为0.1mol/L、NaCl为0.5mol/L；(6)再将丝蛋白膜在1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐/N-羟基琥珀酰亚胺混合溶液室温下浸泡15～45分钟，混合溶液组分及浓度：1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐为0.1～1mg/mL，N-羟基琥珀酰亚胺为0.1～1mg/mL；(7)将丝蛋白膜用磷酸缓冲液冲洗，然后与溶于磷酸缓冲液中的抗菌肽在室温下反应0.5～2小时，抗菌肽在缓冲液中浓度为0.01～1mg/mL；(8)反应后的丝蛋白膜在磷酸缓冲液中浸泡5分钟，接着用磷酸缓冲液冲洗2次，再用去离子水冲洗1次以除去多余的多肽和杂质，然后在空气中自然干燥，即可得到抗菌性丝蛋白膜材料。