[发明专利]高效诱导培养百合小鳞茎的方法

摘要

本发明提供了一种高效诱导培养百合小鳞茎的方法。其特征在于经过胚状体诱导培养及胚状体组织增殖培养，达到较高的快繁速率，再经过籽球分化培养及籽球膨大培养，获得围径3cm以上的可移栽籽球。本发明的籽球增殖率可达到100万粒/年以上，是常规方法的10倍，利用本发明可在获得较多数量小籽球的同时，增加大规格、大粒径籽球的比率。本发明优化了优质百合种球的培育程序，缩短了百合优质种球的繁育时间，且籽球的定植成活率高，生产成本低，适用于切花百合原种的规模化快繁生产。

主权项

1.一种高效诱导培养百合小鳞茎的方法，包括无菌外植体的获取及鳞片剥取，其特征在于经过下列步骤进行培养：A、胚状体诱导培养：在无菌条件下，将灭菌后的鳞片切块接种到单位为mg/L的下列诱导培养基中，在温度为23±3℃，光照时间为10-12h/d，光照强度为1500-2000Lx的条件下培养15-20d，获得胚状体愈伤组织：MS基本培养液6-苄基氨基嘌呤6-BA 2.0-4.0萘乙酸NAA 0.1-0.5蔗糖 30000琼脂 5500pH 5.8；B、胚状体组织增殖培养：在无菌条件下，将步骤A获得的胚状体愈伤组织切片后转入单位为mg/L的下列增殖培养基中，在温度为23±3℃，光照时间为10-12h/d，光照强度为1500-2000Lx的条件下培养15-20d，使胚状体组织分化成大量胚芽：MS基本培养液6-苄基氨基嘌呤6-BA 1.0-2.0萘乙酸NAA 0.1-0.5蔗糖 30000琼脂 5500pH 5.8；C、籽球分化培养：将步骤B生成的丛生胚芽分割成片状，转入单位为mg/L的下列培养基中进行籽球分化培养，其培养条件为：温度18-22℃，全黑暗遮光，培养时间25-35d，即在切块及周围直接生成小籽球：MS基本培养液萘乙酸NAA 0-0.5蔗糖 60000琼脂 5500活性炭 300pH 5.5-5.8；D、籽球膨大培养：将步骤C生成的小籽球分切成单个，剥离外部不规则的小鳞片后转入单位为mg/L的下列培养基中进行生根及膨大培养，培养条件：温度18-22℃，全黑暗遮光，培养时间15-20d，籽球长出根系：1/2MS基本培养液萘乙酸NAA 1.0-2.0蔗糖 60000-90000琼脂 5500活性炭 300pH 5.5-5.8；E、籽球出瓶及包装：将合格籽球从培养基中取出后放入装清水的盆中清洗，滤干水分后立即放入塑料筛中，采用农用链霉素∶百菌清＝1∶1的比例按混合800倍液浸泡20-30min，滤干消毒液后用打孔的塑料袋包装，及时放置到冷库中贮藏。