[发明专利]草坪草转化子的抗生素筛选临界浓度的确定方法

摘要

本发明公开了一种草坪草转化子的抗生素筛选临界浓度的确定方法，该方法包括以下步骤：1)以成熟胚为外植体诱导愈伤组织；2)取愈伤组织置于含不同浓度抗生素筛选剂的培养基上，记录每一处理愈伤组织的重量(W₀)；3)培养一段时间后，再次记录其重量(W_t)，愈伤组织的重量增长率r＝(W_t－W₀)/W₀×100％，愈伤组织的相对质量增长率R＝r/r₀×100％(r₀为不加抗生素筛选剂培养的愈伤组织重量增长率)；4)以愈伤组织的相对质量增长率R为指标，当R≤1％，可以认为此抗生素浓度达到筛选临界浓度。本发明解决了草坪草转化过程中的一个关键问题，即如何有效地获得转化子。本发明为草坪草的外源基因转化提供了基础，具有重要的理论及实践意义。

主权项

1.草坪草转化子抗生素临界浓度筛选方法，该方法包括以下步骤：1)以相应草坪草成熟胚为外植体接种于愈伤组织诱导培养基诱导愈伤组织；所述诱导培养基是在MS基本培养基的基础上添加了2，4-二氯苯氧乙酸；2)待愈伤组织长到直径为2～5mm时，将其转移到继代培养基上进行继代培养，所述继代培养基是在MS基本培养基的基础上添加了2，4-二氯苯氧乙酸；3)取同一培养时期，直径相同的愈伤组织A分置于含不同浓度抗生素筛选剂的培养基上，记录每一处理愈伤组织的重量W0；4)培养一段时间后，再次记录其重量Wt；5)计算愈伤组织的重量增长率r＝(Wt-W0)/W0×100％，愈伤组织的相对质量增长率R＝r/r0 ×100％，r0为不加筛选剂培养的愈伤组织重量增长率；6)以愈伤组织的相对质量增长率R为指标，当R≤1％，则此抗生素浓度达到筛选临界浓度。