[发明专利]一种纳豆激酶的纯化方法

摘要

本发明公开了一种纳豆激酶的纯化方法。本发明的纯化方法是将纳豆菌发酵液离心，取上清液，过滤，滤液经离子交换层析柱，收集含纳豆激酶的洗脱液，经冷冻干燥即获得纳豆激酶冻干粉剂。该纯化方法工艺简单，操作方便，可以规模化生产，产品纯度高，应用前景广阔。

主权项

1.一种纳豆激酶的纯化方法，包括如下步骤：(1)发酵液预处理：将纳豆菌发酵液离心，收集上清液，上清液用0.2～0.45μm滤膜过滤，收集过滤清液；(2)离子交换层析柱纯化：离子交换层析所用凝胶为CM SepharoseFast Flow，凝胶先用pH6.8、含6～70mM的磷酸盐缓冲液平衡好；调节过滤清液的离子浓度，使其电导率为1.6～2.2mS/cm，以6～15mL/min的流速将其加入柱中，先用pH6.8、6mM的磷酸盐缓冲液洗涤柱床，再用pH6.8含6mM的磷酸二氢钠和0～1M氯化钠的洗脱液线型梯度洗脱，流速为5～10mL/min；或把经调节离子浓度的过滤清液在加入柱之前先装入塑料桶中，加入2L已平衡好的凝胶，调pH为6.0，用搅拌机慢速搅拌吸附30分钟，吸附完成，滤掉清液，洗涤凝胶，凝胶上柱，再用pH6.8、6mM的磷酸盐缓冲液平衡柱子，后用pH6.8，含6mM磷酸二氢钠和100mM氯化钠的溶液洗脱，流速为30～100mL/min；用紫外分光光度计在波长为280nm处检测，收集OD280 为0.01以上的洗脱液；(3)冷冻干燥：将纳豆激酶洗脱液经滤膜过滤除菌，加入添加剂及赋型剂，分装，冷冻干燥，获得纳豆激酶冻干粉剂。