[发明专利]乳腺癌干细胞分离方法

摘要

本发明涉及一种乳腺癌干细胞分离方法，属于肿瘤研究技术领域。该方法包括将癌细胞消化成单细胞悬液；配成Percoll不连续密度梯度分离液；叠加单细胞悬液；离心分离各亚群细胞；用实验管和对照管对比检测；调整Percoll分离液的密度，直至筛选出肿瘤干细胞相关亚群含量达到预定富聚度，再用流式细胞仪进一步精分选。本发明结合了现有分离方法的优点，通过Percoll分选或无血清培养，使乳腺癌中的肿瘤干细胞富聚，再通过流式细胞仪精分选，从而保证了分选的效率。初步富聚后肿瘤干细胞比例可达25％以上，再进一步用流式细胞仪分选后纯度可达到99％以上，从而为进一步研究乳腺癌干细胞的各种生物学特性提供条件。

主权项

1.一种乳腺癌干细胞分离方法，包括以下步骤：1)将乳腺癌细胞系或原代乳腺癌组织消化成单细胞悬液；2)按预定密度和层数配置不同密度Percoll分离液，按密度高低依次叠加，制成Percoll不连续密度梯度分离液；3)将消化后的单细胞悬液叠加到Percoll不连续密度梯度分离液顶端，离心分离；4)吸出离心后Percoll分离液中分层的各亚群细胞，PBS洗；5)将分离出的各亚群细胞中每个亚群各设实验管和对照管，实验管和对照管分别加入Hoechst 33342以及Hoechst 33342、Verapamil至预定终浓度，水浴并PBS洗后，用流式细胞仪检测出肿瘤干细胞比例最高的亚群；6)如该肿瘤干细胞比例最高的亚群达到预定的富聚度，则用流式细胞仪分选备用；7)如该肿瘤干细胞比例最高的亚群未达到预定的富聚度，则调整Percoll分离液的密度，重复以上相关步骤，直至筛选出肿瘤干细胞达到预定富聚度的Percoll分离液密度，再用流式细胞仪分选已富聚亚群中的肿瘤干细胞备用。