[发明专利]一种米糠多糖的分离纯化方法

摘要

一种米糠多糖的分离纯化方法，涉及生物分离纯化技术领域。本发明主要采用微波辅助水浸提，经过酶解除去淀粉和蛋白，浓缩、透析获得米糠多糖粗品，再采用Q－Sepharose Big Beads阴离子交换柱层析、Sepharose CL－4B凝胶过滤柱层析对米糠多糖逐步分级纯化，纯化获得的米糠多糖为单一多糖，纯度达90％以上。使获得的米糠多糖精品能用于药品、化工、保健营养品及化妆品的原料或添加剂。

主权项

1、一种米糠多糖的分离纯化方法，其特征是以米糠为原料，用米糠质量/体积比10倍量的去离子水微波辅助提取，取离心后上清液经酶解除淀粉和蛋白，离心后取上清，浓缩，干燥得到米糠多糖粗品；将米糠多糖粗品在磷酸盐缓冲溶液中复溶，依次经过阴离子交换柱和凝胶过滤柱进行分离纯化，最终得到米糠多糖精品，其纯度达到90％；(1)微波辅助水提取：将米糠与10倍质量/体积比的去离子水混合，微波辅助提取，微波功率100-400W，提取2-10分钟，离心分离取上清液；(2)酶解：取上清液依次用淀粉酶和蛋白酶水解，去除淀粉和蛋白；(3)浓缩、醇沉、冻干：将酶解后上清液浓缩至原体积的1/10，在浓缩液中加入95％浓度的乙醇搅拌，静置，收集乙醇终浓度60％-90％的醇沉物，冷冻干燥得米糠多糖粗品；(4)阴离子交换柱纯化：米糠多糖粗品溶于磷酸盐缓冲液，然后用Q-Sepharose Big Beads阴离子交换柱对米糠多糖粗品进行纯化，采用磷酸盐缓冲液进行平衡，分别用0，0.3，0.5和0.7mol/L NaCl溶液、各浓度溶液分别用1个柱体积、以1.5mL/min的流速进行阶段洗脱，0.5mol/L NaCl溶液洗脱得2个峰，其余浓度NaCl溶液洗脱各得一个峰，通过测定各个峰糖含量，0.3mol/L NaCl溶液洗脱峰P2组分具有较高的糖含量和较低的蛋白含量；(5)凝胶过滤柱纯化：将收集的P2组分采用Sepharose CL-4B凝胶过滤柱进行进一步的纯化，用0.05mol/L磷酸盐缓冲液、3倍柱体积进行洗脱，流速为0.5mL/min，得到一个多糖峰P21组分，经过高效液相检测为单一峰，纯度达90％；(6)冷冻干燥：P21组分进行冷冻干燥，制备得白色疏松絮状米糠多糖精品，其易溶于水，不溶于乙醇、丙酮、乙醚有机溶剂，无甜味，无挥发性，水溶液为淡黄色透明澄清溶液。