[发明专利]农杆菌介导的杜仲转基因方法

摘要

本发明涉及一种农杆菌介导的杜仲转基因方法。一种农杆菌介导的杜仲转基因方法，包括下列步骤：a.将杜仲种子接种到MS培养基中，然后将胚剥出，再接种到附加赤霉素的MS培养基中；b.用1/2MS重悬培养基重悬离心收集的农杆菌菌体制得农杆菌菌液；c.将种胚胚轴外植体，接种到诱导培养基于黑暗中培养后，投入农杆菌菌液中，使外植体与农杆菌充分接触，取出外植体，转入共培养基上培养，然后转入筛选培养基中诱导不定芽的再生，最后将材料接种到生根培养基中诱导生根。本发明建立了农杆菌介导的杜仲遗传转化体系，为通过转基因技术深入研究并发掘杜仲的药用、胶用价值奠定了基础。采用本方法胚轴遗传转化率为2.8％左右。

主权项

1.一种农杆菌介导的杜仲转基因方法，包括下列步骤：a、将杜仲种子接种到MS培养基中，待种胚突破种皮0.4-0.7cm左右时，将胚剥出，接种到附加1.0-2.0mg/L赤霉素的MS培养基中；b、将农杆菌单菌落，用牙签挑取，加入到YEP液体培养基中培养震荡培养，直到OD值达到0.4～0.7，离心收集菌体，用1/2MS重悬培养基重悬制得农杆菌菌液；c、将种胚胚轴切成0.4-0.7cm左右的外植体，接种到诱导培养基于黑暗中预培养后，投入步骤b农杆菌菌液中，使外植体与农杆菌充分接触，取出外植体，转入共培养基上培养，然后转入筛选培养基1中诱导不定芽的再生，再在筛选培养基2中进行壮苗，最后将材料接种到生根培养基中诱导生根。