[发明专利]一种Myostatin特异性抗体的治疗性疫苗及其制备方法

摘要

本发明公开了一种Myostatin特异性抗体的治疗性疫苗及其的制备方法，利用人工合成DNA的方法获得了在N－端连接了Th细胞辅助表位TT_830－844人myostatin C－末端区基因片段，其基因序列为TT－Ms，将合成的TT－Ms基因片段克隆至pQE30原核表达载体，构建了pQE－TT－Ms重组表达载体，利用PCR扩增Ms基因片段，构建了pQE－Ms重组表达载体；在大肠杆菌中表达了融合蛋白His－TT－Ms和His－Ms，对蛋白进行鉴定后作为myostatin的蛋白疫苗；将合成的TT－Ms基因片段克隆至pVAC1－cms基因疫苗专用质粒，构建了pVAC－TT－Ms重组质粒，体外进行了目的蛋白表达的鉴定，作为myostatin基因疫苗。本发明的方法所构建的Myostatin蛋白疫苗和基因疫苗，免疫健康成年BALB/c小鼠，可诱导出针对人myostatin分子的特异性抗体，免疫小鼠骨骼肌质量和力量明显提高。

主权项

1.一种Myostatin特异性抗体的治疗性疫苗，其特征在于，将合成的TT-Ms基因片段克隆至pQE30原核表达载体，构建pQE-TT-Ms重组表达载体，利用PCR扩增Ms基因片段，构建pQE-Ms重组表达载体；在大肠杆菌中表达融合蛋白His-TT-Ms和His-Ms，对蛋白进行鉴定后作为myostatin的蛋白疫苗；或将合成的TT-Ms基因片段克隆至pVAC1-cms基因疫苗专用质粒，构建pVAC-TT-Ms重组质粒，体外进行目的蛋白表达的鉴定，作为myostatin基因疫苗；所述的TT-Ms基因片段对应的氨基酸序列具体如下：Gly Ser Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu1 5 10 15Ala Ala Ala Glu Phe Asp Phe Gly Leu Asp Cys Asp Glu His Ser Thr 20 25 30Glu Ser Arg Cys Cys Arg Tyr Pro Leu Thr Val Asp Phe Glu Ala Phe 35 40 45Gly Trp Asp Trp Ile Ile Ala Pro Lys Arg Tyr Lys Ala Asn Tyr Cys 50 55 60Ser Gly Glu Cys Glu Phe Val Phe Leu Gln Lys Tyr Pro His Thr His65 70 75 80Leu Val His Gln Ala Asn Pro Arg Gly Ser Ala Gly Pro Cys Cys Thr 85 90 95Pro Thr Lys Met Ser Pro Ile Asn Met Leu Tyr Phe Asn Gly Lys Glu 100 105 110Gln Ile Ile Tyr Gly Lys Ile Pro Ala Met Val Val Asp Arg Cys Gly Cys 115 120 125Ser *** Val Asp130。