[发明专利]海水鱼卵子石蜡切片方法

摘要

一种海水鱼卵子石蜡切片方法，包括固定剂的选择、脱水程序的确定、透明程序的确定、透蜡程序的确定、染色方法的改进，省略了鱼卵石蜡切片过程中难以操作的卵膜剥离程序，简化了程序、提高了工作效率。克服了海水鱼卵子石蜡切片中存在的卵子变形、切片不连续、存在空洞等问题，获得良好的切片和染色质量，该方法简单易操作，不需专门设备，药品易得，可用于海水鱼类早期发育生物学研究。

主权项

1、一种海水鱼卵子石蜡切片方法，它的操作程序是：固定、脱水、透明、透蜡、包埋、切片、脱蜡以及染色，其特征在于在海水鱼卵子石蜡切片过程中，对固定剂、脱水程序、透明程序、透蜡方法和染色方法进行了改进，即进行了固定剂的选择、脱水程序的确定、透明程序的确定、透蜡程序的确定、染色方法的改进：固定剂的选择：采用电镜样品固定常用的戊二醛，戊二醛的浓度为1.5％，采用脱脂棉过滤的海水作为溶剂；固定过程中更换固定液3～4次；脱水程序的确定：样品采用乙醇脱水，采用：85％乙醇50min、95％乙醇45min、95％乙醇45min、100％乙醇35min、100％乙醇35min；85％到95％乙醇采取10％的浓度梯度，95％到100％乙醇采取5％的浓度梯度，每梯度2次脱水程序，样品脱水前用100％琼脂将样品包埋定位；透明程序的确定：采取1∶1的二甲苯∶乙醇过渡方法；具体透明过程如下：1∶1二甲苯∶100％乙醇15s，二甲苯10s，二甲苯10s；透蜡程序的确定和包埋：透蜡采用熔点为42～47℃的软蜡，透蜡程序如下：透蜡时间3小时，期间换蜡一次，即石蜡1h30min，石蜡1h30min，透蜡后用纸盒包埋；采用普通生物切片机切片，切片厚度5μm；用恒温水浴展片，动物胶贴片；染色方法的改进：染色采用了曙红苏木素复染，苏木素染液配方如下：热蒸馏水2000ml，苏木素2g，碘酸纳0.4g，钾明矾150g，柠檬酸2g，水和氯醛100g；伊红染液配方：1％曙红Y水溶液100ml，98％乙醇780ml，冰醋酸4ml。